生物技术二班 王静 0701024226.docVIP

天津农学院 微生物分类学结课论文 题目:酵母菌分类学 学生姓名 王静 系 别 农学系 专业班级 07级 生物技术专业 二班 成绩评定 2010年6月 酵母菌分类学 【摘要】根据遗传物质与酵母菌的关系，目前,应用于酵母菌鉴定的方法有DNA 限制性内切酶作用片段多型性（REFP）、DNA限制性酶切片段多态性（RFLP）、随机扩增多态DNA（RAPD）等。另外，还可根据酵母菌细胞壁碳水化合物的组成对酵母菌进行分类。 【关键词】酵母菌 REFP RFLP 线粒体DNA限制性酶切分析 26SrDNA的限制性内切酶分析 RAPD 细胞壁碳水化合物组成 20世纪80年代,酵母菌鉴定的主要工具有对G+C%测定、确定单倍体细胞中DNA 含量、以及DNA-RNA和DNA-DNA杂交重组的研究。VANGHAN等以DNA的碱基对组成和DNA-DNA重组作为指标鉴定酵母菌,表明酿酒酵母与贝酵母、薛氏酵母、意大利酵母、葡萄汁酵母的G+C%含量的范围落在38.5%～39.5%;DNA-DNA重组表明有90%的碱基序列是相同的。所以,后4种应该归并于酿酒酵母中。90年代后,检测基因组多态性的DNA指纹技术(DNA fingerprint) 应运而生,比传统分类来源更具有唯一性。酵母菌细胞的基因组分布着各种形式的重复序列,很少受到自然和人工选择作用的影响,保持着高度的多态性,从而得到个体特异性极为显著的DNA指纹图。目前,应用于酵母菌鉴定的方法有REFP、RFLP、RAPD 等。 REFP(DNA限制性内切酶作用片段多型性)是指每种DNA限制性内切酶都有特定的作用位点,来源不同的菌株的DNA分子、结构和序列不同,用某一限制性内切酶作用后,会形成大小不等的一些片断,凝胶电泳后,经荧光染色,在紫外灯下形成种(株)的特异性图谱,分析图谱可以达到区分菌株的目的。通过与模式菌株的图谱比较来鉴定菌株。LEE等用REFP方法成功地找到了葡萄汁酵母(S.accharomycesurarum)种内不同株与酿酒酵母(S.cerevisiae)之间的区分。然而,REFP只是根据DNA分子片断的大小来区分菌株,并不能反映出这些片断的结构以及它们在原来DNA分子中的位置。 RFLP(DNA限制性酶切片段多态性)是REFP的改进形式,采用DNA探针和分子杂交技术,特异性更强。BOSTEN等在1980年最早用此法对菌种(株)进行鉴定。MASNEUF等(1996)分析了酿酒酵母(S.cerevisiae)和巴氏酵母(S.bayanus)的MET2基因,认为应该将巴氏酵母(S.bayanus)从酿酒酵母(S.cerevisiae)中单列出来,成为一个特定的种。ESTEVEZARZOSO等利用CfoI、HaeIII、HinfI3种内切酶消化扩增后鉴定了从食物中分离出的132株酵母菌,它们分别属于25个属,并且获得每一种的特征图谱。NAUMOV等分析了从香槟酒中分离菌株的MET2基因,找到了巴氏酵母(S.bayanus)的两个变种。 核糖体存在于所有生物细胞中,几乎有一个共同的起源,而且某些rRNA序列对所有的同源生物是相当保守的,从而可以确定所有生物的分类地位。核基因组rDNA的内转录区间ITS(Internal Transcribed Spacer)适用于种以下的分类和鉴定。利用引物扩增rDNA的ITS区域,用限制性内切酶消化,不用杂交,也可获得RFLP图谱。FERNANDEIESPLNAR等扩增了5.8SrRNA ,包括了内转录区间ITS1和ITS2,扩增后的基因数目从700～870bp不等,以此对雪利酒中的酵母菌进行RFLP鉴定分析。KUHLEA等(2001)用此法分析了啤酒中的酵母类群。 线粒体DNA限制性酶切分析（mtDNA-RFLP分析）是一种能将菌种鉴定到种甚至菌株水平的鉴定方法。该法根据不同酵母菌种具有种内独特的mtDNA限制性图谱，通过比较各自的酶切物理图谱，根据限制性片段在不同群体中的共享度计算遗传距离，该法适用于近缘种群间的鉴定或种内群体的比较。 26SrDNA的限制性内切酶分析早在1990年就被用于隐球酵母属种间的区分鉴定。M. M.Baleiras CoutoT等使用26SrDNA-RFLP对葡萄酒发酵过程中non-S accharom yces进行分析,证明其为一种简单、可信的分析方法。26SrD