石斛组织培养.docVIP

一、增殖、分化培养基的筛选 1 材料与方法 1.1 材料 原球茎为实验室培养（MS+4.0mM NAA+10%香蕉） 1.2 方法 1.2.1 培养基的配制 表1 影响因素与水平的设定 水平 培养基 NAA(mg/L) 马铃薯提取液 1 MS 0 0% 2 1/2MS 0.25 20% 3 - 0.5 - 表2 培养基 试验号 培养基 NAA(mg/l) 马铃薯提取液 pH 重复数 1 1 1 2 5.80 10 2 1 2 1 5.81 10 3 1 3 2 5.83 10 4 2 1 1 5.81 10 5 2 2 2 5.80 10 6 2 3 1 5.79 10 注： 10各三角瓶4个（容积200ml），小瓶6个（容积100ml）； 大瓶注入培养基25ml瓶中注入15ml培养基。 瓶号 试验组 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 1 0.41 0.45 0.41 0.40 0.52 -0.44 1.25 1.17 1.20 1.18 2 0.29 0.41 0.52 0.48 0.32 0.44 1.01 1.05 1.07 0.88 3 0.30 0.40 0.39 0.44 0.42 0.22 1.08 1.02 0.65 0.93 4 0.51 0.54 0.58 0.44 0.29 0.39 1.07 1.21 1.12 1.00 5 0.39 0.36 0.29 0.57 0.46 0.41 0.84 0.97 1.29 0.96 6 0.40 0.40 0.37 0.36 0.40 0.38 0.91 1.49 0.86 0.78 1.2.3 指标的确定与结果统计 接种后77天统计原球茎重量、分化程度。 2 结果 图1 各处理原球茎增殖、分化情况 （从左至右处理号依次为：1、2、3、4、5、6） 2.1 增殖重量 表4 各瓶的原球茎增殖率（%） 瓶号 试验组 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 1 17.07 - - 0.00 -57.69 -122.73 238.40 229.91 336.67 175.42 171.45 2 - - - - - - - - 20.56 -100.00 -80.06 3 - -52.50 - -45.45 -85.71 - 340.74 126.47 173.85 - 59.66 4 -41.18 35.19 -13.79 -90.91 3.45 -41.03 5.61 -16.53 29.46 -80.00 -17.62 5 5.13 -68.97 -84.21 -93.48 - 242.86 238.14 93.80 -6.25 55.66 6 - - - - -50.00 -76.32 52.75 26.17 26.74 67.95 -6.14 注：“-”表示材料已死亡。 2.2 分化情况 表5 各瓶的原球茎分化情况 瓶号 试验组 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 1 +++ ++++ ++++ +++ +++ +++ ++++ ++++ 2 +++++++ 3 ++ +++ +++ +++ ++++ ++++ +++ 4 ++++ +++ ++ +++ ++++ ++ ++++ +++ ++ +++ 5 +++ ++ ++++ +++ +++ +++++++ ++++ +++ 6 +++ ++ +++ +++ ++++++ ++++++ 注：“+”的数目表示分化程度（综合考虑分化出芽的数量、叶片数量）。 表4所示，大瓶中的存活率比小瓶中的存活率高，这与接种量、培养基量有关，小瓶中培养基水分保持较为困难；增殖率以1号，即MS+20%马铃薯培养基中最高。从表5可以看出该组的分化情况并非最好。因此，在后续试验中可以选用MS+20%马铃薯培养基为增殖培养基。分化培养基以5号，即1/2MS+0.25mM NAA+20%马铃薯为佳。 二 原球茎辐照特性 第一次辐照 辐照时间：2008年2月29日 统计时间：2008年4月11日 培养基：1/2MS+2.0 mg/L6-BA+0.2 mg/LNAA 统计项目：存活率 表6 不同剂量照射后原球茎存活率 剂量（Gy） 各重复存组活率 总存活率(%) CK 4/4，8/8，8/8，9/9，9/9，5/5 100 25 4/7，5/6，5/8，5/7，7/9，6/6，2/5 70.83 50 3/9，6/7，4/7，1/6 48.28 75 3/7，3/4，4/5 62.5 100 3/7，10/13，5/10，4/9 56.41 125 4/6，1/5，7/7，3/