抑制自噬增强TRAIL诱导前列腺癌凋亡的试验研究-第三军医大学学报.DOCVIP

抑制自噬增强TRAIL诱导前列腺肿瘤细胞PC-3凋亡的实验研究 王文轩 何卫阳﹡ 苟欣 重庆医科大学附属第一医院泌尿外科 400016 摘要：目的：研究TRAIL处理前列腺肿瘤细胞PC-3，观察其能否诱导PC-3自噬以及自噬在其中的作用。方法：利用免疫印记技术检测TRAIL处理PC-3后自噬相关蛋白LC3-II和p62的表达变化；通过CQ抑制自噬观察对TRAIL诱导前列腺癌细胞凋亡的影响。结果：TRAIL可以增强自噬相关蛋白LC3-II的表达，同时促进自噬相关蛋白p62的降解，抑制自噬可以显著增强TRAIL对前列腺癌细胞的毒性作用以及凋亡蛋白Caspase8的活化以及PARP的裂解。结论：TRAIL可以诱导前列腺肿瘤细胞PC-3自噬的发生，自噬对前列腺肿瘤细胞主要起保护作用。 关键词：前列腺癌，自噬，TRAIL，凋亡 Inhibition of autophagy enhance TRAIL-induced apoptosis in PC-3 cells Wenxuan Wang, Weiyang He, Xin Gou Abstract Objective: To investigate whether the TRAIL can induce autophagy in prostate cancer cells PC-3 and the role of autophagy in it. Methods: Detection the expression of autophagy-related proteinLC3-II and p62 in PC-3 by Western blotting after treatment by TRAIL; and the toxicity of TRAIL on PC-3 after suppression autophagy. Results: TRAIL can enhance the expression of autophagy-related protein LC3-II, and promote degradation of autophagy-related protein p62; inhibition of autophagy can enhance the cytotoxic effect of TRAIL on PC-3. Conclusion: TRAIL can induce autophagy in PC-3; and autophagy play a protective role of autophagy in PC-3. Key words Prostate cancer，autophagy，TRAIL，apoptosis 随着人民生活水平及健康认识的提高，我国的前列腺癌的发病率在逐年升高1-2。多数病例发现时已处于晚期，失去手术时机。去势与抗雄治疗虽然效果较好，但一般在18-24个月后转化为激素非依赖性前列腺癌，此时，治疗极为棘手。化疗作为一项重要手段，在激素非依赖性前列腺癌的治疗地位越来越受到重视。但原发性或获得性药物抵抗明显降低了化疗药物的效果。 研究表明，Tumor necrosis factor-related apoptosis-inducing ligand (TRAIL）可以有效的诱导肿瘤细胞凋亡，且副作用很小，是一个极具前景的肿瘤治疗药物3,4。然而，TRAIL耐药却限制了它的治疗效果，而且其机制仍不明确。 TRAIL与它的功能受体DR4及DR5结合后通过外源性凋亡通路促进肿瘤细胞凋亡，TRAIL与受体结合后促进死亡复合体的形成，死亡复合体包括FADD、Caspase8以及c-FLIP。Caspase8通过自我活化，促进死亡受体下游效应蛋白Caspase7和Caspase3的激活，从而诱导凋亡。 自噬( autophagy)是细胞进化的保守信号通路，通过降解长命蛋白及受损细胞器实现能量的再循环利用，维持细胞的能量平衡。自噬对于维持细胞在缺乏营养状态下的生存以及清除细胞受损的细胞器及多余的蛋白至关重要5,6。 目前文献报道，放、化疗可以诱导自噬，但放、化疗诱导的自噬在不同的制剂以及不同的细胞系其作用可能不同，或起促生存或起促死亡作用7。虽然有文献报道TRAIL处理结肠癌可以诱导细胞发生自噬，而且抑制自噬可以增强肿瘤细胞TRAIL的敏感性8；但TRAIL对于前列腺癌细胞是否可以诱导自噬以及自噬的作用如何，还尚不清楚。 本文拟研究TRAIL对前列腺癌细胞自噬水平的影响，以及自噬在其中的作用。 1 材料与方法 1.1 试剂 改良型RPMI1640