抗痫煎剂对戊四氮致痫大鼠海马神经细胞及Bcl-2蛋白表达影响.pdfVIP

目 录 中文摘要 1 英文摘要 3 引 言 5 正 文 9 1 实验材料 9 1.1 实验动物 9 1.2 主要药品和试剂 9 1.3 主要仪器 9 2 方法 10 2. 1 动物模型的筛选制备和分组 10 2.2 药物干预 10 2.3 主要药物剂量的换算及配制方法 10 2.4 大鼠行为学的观察 11 2.5 组织化学 11 2.5.1 石蜡切片的制备 11 2.5.2 HE 染色 12 2.5.3 免疫组化染色 12 2. 6 图像及统计学分析 13 2.6.1 图像分析 13 2.6.2 统计学处理 13 3 结果 13 3.1 抗痫煎剂对PTZ 致痫大鼠痫性发作的影响 13 3.2 海马CA1 区、CA3 区神经细胞病理变化 14 3.2.1HE 染色结果 15 3.2.2 免疫组织化学染色结果 16 4 讨论 16 4.1PTZ 的致痫机制 17 4.2 癫痫与细胞凋亡 19 4.3 细胞凋亡与Bcl-2 基因 21 4.4 中医对癫痫的认识23 4.5 抗痫煎剂的立法、组方原则及现代药理研究23 4.6 阳性对照药物的选择25 4.7 抗痫煎剂对癫痫病的疗效和机理探讨26 5 问题与展望 26 5.1 存在的问题 26 5.2 展望 27 结 论 28 参考文献 29 附 图 34 综 述 38 致 谢 44 攻读学位期间发表的学术论文目录 45 作者声明 46 个人简历47 中 文 摘 要 目 的：利用戊四氮(pentylenetetrazole ，PTZ)制造急性癫痫 (epilepsy ，EP)发作的动物模型，观察抗痫煎剂对急性癫痫发作大鼠 海马区神经元Bcl-2 蛋白的表达的影响及对癫痫发作的控制情况，评 价抗痫煎剂对急性癫痫发作大鼠模型的控制情况，神经保护作用及可 能的机制。 方 法：Sprague-Dawley(SD) 大鼠60 只，随机选出10 只作为正 常组，其余50 只，用戊四氮（PTZ ）55mg/kg 腹腔注射造成大鼠急性 癫痫发作模型，模型成功与否以其发作时的行为变化为主要依据，按 Racine 分级：0 级：无任何反应；1 级：面部阵挛，包括眨眼、动须、 节奏性咀嚼等；2 级：1 级加节律性点头；3 级：2 级加前肢阵挛；4 级：3 级加后肢站立；5 级：4 级加摔倒。达到4 ～5 级的大鼠选用， 未达到4 级的大鼠淘汰。其中造模成功的40 只SD 大鼠，随机分为4 组，每组各10 只。一共五组，A 组：正常对照组；B 组：模型组；C 组： 抗痫煎剂低剂量预处理组；D 组：抗痫煎剂高剂量预处理组；E 组：丙戊酸钠预处理组。正常组与模型组：灌服生理盐水，每日2ml/kg； 中药低剂量组和高剂量组，灌服抗痫煎剂，分别为5g/kg.d ，10g/kg.d； 西药组：灌服丙戊酸钠90mg/kg.d 。连续灌胃七天。第八天再给B ，C ， D ，E 组予戊四氮（PTZ ）55mg/kg 腹腔注射，A 组腹腔注射等量生理 盐水，然后观察大鼠行为学的改变。 结 果：潜伏期方面，D 、E 组与B 组比较，其潜伏期明显延长， 差异具有显著性意义(P0.05) 。发作级别方面，B 组大鼠均为强直阵 挛发作(V 级) ，其余各组发作介于0~V 级之间， C 、D 、E 组与B 组 比较，差异有显著性意义(P0.05) 。 免疫组化结果显示，神经细胞Bcl-2 蛋白表达方面，A 、B 组Bcl-2 抗凋亡蛋白表达较少；经药物预处理后，C 、D 、E 组大鼠海马神经 1 细胞Bcl-2 蛋白表达较B 组明显增多 (P0.05)；其中C 组与D ，E 组 差异有显著意义（P0.05 ）；D 、E 组相比无显著性差异(P0.05) 。 结 论：1.PTZ 能成功诱导出大鼠全身强直阵挛模型，在本实验 中其适宜剂量为55mg/kg,所造急性癫痫大鼠能观察到痫性大发作。2. 抗痫煎剂对PTZ 诱导急性癫痫大鼠的痫性发作具有较强的抑制作用。 3.抗痫煎剂对PTZ 致痫大鼠所致的神经细胞凋亡有抑制作用，其抑制 凋亡的分子机制可能是通过促进Bcl-2 蛋白表达