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第38 卷 第4 期 渔 业 科 学 进 展 Vol.38, No.4 2 0 1 7 年 8 月 PROGRESS IN FISHERY SCIENCES Aug., 2017 DOI:10.11758/yykxjz.20160303001 / 鲤疱疹病毒2 型微滴式数字PCR 检测 方法的建立及比较分析* 赵 欣1,2 贾 鹏2,3 刘 莹2,3 王津津2,3 史秀杰2,3 潘 广2,3 郑晓聪2,3 于 力2,3 何俊强2,3 刘 荭2,3① 吴志新1① (1. 华中农业大学水产学院 武汉 430070; 2. 深圳出入境检验检疫局动植物检验检疫技术中心 深圳 518045; 3. 深圳市检验检疫科学研究院 深圳 518001) 摘要 本研究建立了定量检测鲤疱疹病毒2 型(Cyprinid herpesvirus 2, CyHV-2) 的微滴式数字PCR (Droplet digital PCR, ddPCR)检测方法，并与实时荧光定量PCR(Quantitative real-time PCR, qPCR)检 测方法的灵敏性、重复性、特异性和临床样品检测做了比较分析。结果表明，与 qPCR 相比， ddPCR 具有相同的特异性，其灵敏性比qPCR 低20 倍。在定量CyHV-2 DNA 时，ddPCR (R2=0.994) 和qPCR (R2 2 =0.994)均表现出良好的线性关系，且2 种检测方法间的定量值呈正相关(R =0.989) 。在 定量检测相同稀释度的CyHV-2 DNA 时，qPCR 的定量值始终比ddPCR 高10 倍。ddPCR 的组内和 组间重复变异系数(CV)分别为 0.59%–11.26%和 6.55%–23.21% ，而 qPCR 为 16.57%–27.56%和 22.31%–56.73% ，说明ddPCR 具有更好的稳定性。在临床样品定量检测时，ddPCR 的检出率稍高 于qPCR 。本研究建立的ddPCR 能够准确定量检测CyHV-2 ，将为CyHV-2 相关研究提供有益参考。 关键词 微滴式数字PCR ；鲤疱疹病毒2 型；实时荧光定量PCR ；定量检测 中图分类号 S945 文献标识码 A 文章编号 2095-9869(2017)04-0126-08 鲤疱疹病毒 2 型也称为金鱼造血器官坏死病病 养殖业危害巨大，主要发生在春、秋季节，发病率 毒(Goldfish haematopoietic necrosis virus, GFHNV) ， 受水温影响较大，15–25℃时易发病，水温高于25 ℃ 因该病原是第 2 个自鲤科鱼类分离的疱疹病毒，按 时，发病率降低(Groff et al, 1998) 。1992 年，日本首 照国际病毒分类委员会(ICTV) 的系统命名规则，正 次报道金鱼暴发该病，死亡率接近 100% (Jung et al, 式命名为鲤疱疹病毒 2 型(Cyprinid herpesvirus 2 ， 1995)。随后，在美国(Groff et al, 1998; Goodwin et al, CyHV-2) 。该病毒属于疱疹病毒目(Herpesvirales) 、 2006a) 、澳大利亚 (Stephens et al, 2004) 、英国 疱疹病毒科(Alloherpesviridae) 、鲤疱疹病毒属