15 酶抑制和其动力学2次.pptVIP

第十章 酶的抑制及其动力学;第一节 抑制作用及其分类 ;2 抑制作用(inhibition) 指酶的必需基团受某种化学物质的影响而被改变，导致酶活性降低或失活。 特点: 抑制剂部分或全部接到功能基上或基团 的性质发生改变。但酶蛋白并未变性。 3 去激活作用 加入金属鳌合剂后，去除金属离子结合，使酶活性降低。 ;二 抑制程度;（三）可逆抑制作用与不可逆抑制作用的鉴别 * 物理方法处理：透析，超滤，凝胶过滤； * 动力学方法： ?取不同量的酶加到含有等量[S]和[I] 的等体积反应体系中，测定反应初速度，以v ~[E]作图 ?将酶与抑制剂预保温后，取不同量混合液加到含有等量[S]的等体积反应体系中，测定初反应速度，以v ~[E]作图 ;第二节 不可逆抑制作用机理 ; 金属酶抑制剂： 能与金属形成络合物，毒害以金属离子为活性中心的金属酶。如氰化物、硫化物、叠氮化物和CO等 重金属毒物： 重金属盐类，包括Hg、Pb、Ag、Cu等为蛋白沉淀剂；或作用于含 –SH的酶 有机汞，有机砷化合物： 作用于酶分子中的Cys巯基，如：路易斯毒气(Lewisite)；解毒(BAL，即二巯基丙醇) 青霉素(Penicillin) ： 作用于糖肽转肽酶(glycopeptide transpeptidase ) 的Ser羟基; 氧化剂：包括一些弱氧化剂或光敏剂 过甲酸 -咪唑基 光敏剂 + E- -SH 氧化 四硫硫酸钠 - -OH 还原剂: -S-S- 含-SH化合物 2 -SH 其它修饰剂：重氮化、硝化、酯化等 注意：酰化试剂或烷化剂等一般全部或部分以共价方式结合到酶上；但氧化剂或还原剂是改变或修饰基团的性质。;二 专一性不可逆抑制 ;(二) Kcat 型(又称自杀性底物) 根据酶的作用机理设计的，不仅结构和底物类似，且是酶的天然底物，可被酶结合和催化。其中含一个潜伏性基团，由于酶的催化而暴露或活化，从而集中攻击酶的活性中心。又称酶的自杀性底物(Suicidal substrate) E + Si Ks E·Si Kcat E·I Ki E-I Ks: ESi的解离常数； Kcat： ESi转化为EI的催化常数 抑制作用的关键取决于Kcat，Kcat越高抑制程度高 ;Kcat型抑制剂比Ks具有更高的专一性： Kcat型抑制剂是酶的底物，不仅被酶结合，而且能被酶催化。可区分具有相同底物，但催化机制不同的酶 Kcat型抑制剂只能形成于酶反应中心，因而专一性攻击酶活性中心基团。 例如某些机磷农药：敌敌畏、敌百虫、乐果等 (RO)2 - P -X O(S) ; O2N- - O-P OC2H5 肝氧化酶 O2N- - O-P OC2H5 S OC2H5 O OC2H5 (对硫磷) 胆碱酯酶 (对氧磷) Ks O2N- -O- P OC2H5