Dapper通过对WNT信号通路调控缓解神经病理性疼痛机制研究和其中所涉和线粒体在其中扮演角色研究.docVIP

Dapper通过对WNT信号通路的调控缓解神经病理性疼痛的机制研究及其中所涉及的线粒体在其中扮演角色的研究 Dapper study by WNT signaling pathway relieve neuropathic pain mechanisms involved in research and mitochondria play a role in which Dapper WNT signaling pathway neuropathic pain mitochondria 越来越多的研究表明，正常线粒体的分裂融合运动对维持其功能有着重要的作用。线粒体形态的改变与其功能密切相关，过度分裂是导致细胞凋亡的重要原因，但关于线粒体分裂在脑缺血再灌注损伤中的作用目前仍不清楚。本研究首先在体内脑缺血再灌注损伤模型和体外脑缺氧复氧模型上，通过对细胞凋亡、线粒体形态和超微结构、线粒体Ca2+和活性氧、线粒体分裂蛋白Drp1和Fis1、凋亡调节蛋白Bcl-2、Bax以及细胞色素C的表达等的检测，探讨线粒体分裂在脑缺血再灌注损伤中的作用及机制，然后，再在上述实验模型上，通过对线粒体形态学及线粒体分裂相关蛋白表达的检测，探讨线粒体钙单向转运体MCU对线粒体分裂的调控作用；通过对线粒体钙、活性氧（ROS）及信号转导相关蛋白的检测，探讨MCU对线粒体分裂的可能调控机制。本研究将为脑缺血再灌注损伤提供新的理论基础和治疗靶点。 1.1 研究意义 缺血脑组织在恢复血液灌注后，会发生细胞功能代谢障碍和结构破坏进一步加重的病理过程，称之为脑缺血-再灌注损伤。如何避免或减轻脑组织在循环中断后的缺血-再灌注损伤，是临床医学面临和需要解决的重要问题。细胞凋亡是导致缺血再灌注损伤的重要因素，因此，脑缺血再灌注损伤治疗的关键是减轻半暗带区的神经细胞凋亡。研究表明，线粒体在细胞凋亡中发挥着重要的作用[1,2]。近年来，有关细胞凋亡研究的关注点主要集中在线粒体的形态变化上，使线粒体分裂与细胞凋亡之间的关系成为研究焦点。线粒体分裂导致的线粒体片断化是细胞凋亡的前提，通过药物抑制线粒体分裂蛋白（dynamin-related protein 1，Drp1）可以抑制心肌缺血再灌注损伤后心肌细胞凋亡[3]，减轻急性肾损伤后肾小管细胞凋亡以及缺血性视网膜病变后细胞凋亡[4,5]。但是关于线粒体分裂在脑缺血再灌注损伤中的作用目前仍不清楚。因此，本研究探讨线粒体分裂在脑缺血再灌注损伤中的作用及机制，为脑缺血再灌注损伤提供新的理论基础和治疗靶点。 国内外研究现状及发展动态分析 2.1 线粒体分裂与细胞凋亡 线粒体作为细胞凋亡的重要执行者[6]，其结构与功能异常可导致细胞凋亡。各种凋亡刺激引起的线粒体膜电位下降、膜通透性转换孔(permeability transition pore，PTP)开放以及细胞色素C(Cytochrome C, CytC)、凋亡诱导因子(Apoptosis inducing factor,AIF)等线粒体蛋白的释放被认为是诱导凋亡发生的重要事件[7]。Bcl-2家族是细胞线粒体途经凋亡的执行者。目前已经发现的Bcl-2蛋白家族按功能可分为两类，一类是与Bcl-2一样具有抑制凋亡作用的蛋白，如哺乳动物的Bcl-Xl、Bcl-W、Mcl-1等，而另一类具有促进凋亡作用的蛋白，如Bax、Bad、Bak、Bid等[8]。细胞凋亡时：首先Bax从胞浆转位到线粒体外膜，促使线粒体孔道开放，介导线粒体中CytC、凋亡蛋白酶活化因子1(Apoptotic protease activating factor 1，APAF1)释放到胞浆，从而激发caspase的级联激活反应，最终导致细胞凋亡。Bcl-2家族的Bcl-xL、Bcl-Xs、Bax、Bcl-2、Bad、Mc1-1等则可以形成蛋白二聚体，而特定的蛋白二聚体则可作为在细胞死亡信号通路上的分子开关。 随着电子体层成像(electron tomography)和计算机技术在生物学中的发展及应用，人们对线粒体形态在凋亡中的改变越来越关注[9]。在生理状况下，线粒体是一种高度动态的细胞器，其在细胞内彼此连接，呈现立体的管网状结构，但其形态不是一成不变的，线粒体形态可以表现为椭圆形、长管状、网络状，以及短小状等不同形状，进一步观察发现线粒体发生频繁的融合与分裂，其分裂速度和融合速度处于一种平衡，这种平衡的破坏，往往伴随着线粒体形态的变化与机体的生理功能障碍[10,11]。在细胞凋亡发生时，线粒体分裂占优势，发生片段化，表现为线粒体短小，显微镜下成点状。在多种凋亡模型中都发现了线粒体的片段化，而且线粒体数量也显著增加，说明线粒体分裂对细胞凋亡的发生具有重要意义。尤其在神经细胞线粒体上也检测到线粒体分裂蛋白的存在，且其与神