牛血清白蛋白与酸性品红的结合反应.PDFVIP

第 卷 分析化学 （ ） 研究简报 第 期 :N OPHQR =7FQ 7P ! 年 月 :### ! 4I,+(+ S.T5,)’ .U F,)’V-I/)’ 4+@I(-5V !N% 2 !N$ 牛血清白蛋白与酸性品红的结合反应 俞 英! 程晓伟 （华南师范大学化学系，广州 ! #$%） 摘 要 研究了在酸性溶液中牛血清白蛋白与酸性品红的结合反应，认为两者主要是通过静 电引力而结合，结合反应符合’()*+,-. 提出的相分配模型，并探讨了实验条件对结合反应的 表观结合常数 、结合数 、 灵敏指数的影响。 ! / 0),1+’’ 关键词 牛血清白蛋白，酸性品红，结合反应，分光光度法 ! 引 言 在酸性介质中，蛋白质与生色探针如考马斯亮蓝、铬天青 等的结合反应已在生物化学 0 〔 〕 和临床分析中得到广泛应用，但这类探针反应的作用机理和平衡规律尚在研究之中 2 % 。酸 〔〕 3 性品红是一种生物染色剂，曾用于蛋白质的染色定性中 ，但其与牛血清白蛋白结合反应的 作用机理未见报道，本文对酸性品红与牛血清白蛋白的作用机理进行研究，认为两者主要是通 过静电引力而结合，并发现结合反应不符合经典的0/)-/4)51 模型，符合相分配模型，并对结合 参数进行了测定和计算。 实验部分 6 ! 仪器与试剂 型紫外可见分光光度计（日本岛津公司）； 型分光光度计（上海第三分析仪器 7 89:3# ;: 厂）；=09% 型酸度计（上海雷磁仪器厂）。酸性品红储备液：称取酸性品红 6 ## 3 ，加水溶 ? 解后定容于!## @ A ，浓度为% 63: B # C % @.’D A 。牛血清白蛋白溶液（简称E0F ，上海伯奥生物 科技有限公司，分子量以$!### 计）：取适量的E0F ，用# 6 ! G 的H)’ 溶液溶解定容。缓冲溶 液： 广泛缓冲液，盐酸 乙酸钠缓冲溶液。十二烷基苯磺酸钠： 水溶液。十 E5I--.,9J.KI,(., 9 G 六烷基三甲基溴化铵： 水溶液。 # 6 : G 6 实验方法 在 比色管中加入酸性品红、 缓冲液、 溶液，以水定容，摇匀，以水为参比扫 # @ A = E0F 描吸收光谱或在 测定试剂空白的吸光度 和结合反应体系的吸光度 ，并求出 # !33 ,@ # # # ! L # # C # 。 # 结果和讨论 # 6 ! 吸收光谱及反应机理 图 为固定酸性品红浓度， 逐渐增大的吸收光谱图。 时，溶液几乎无色，这种