thermolcms化合物优化细则.pdf

Thermo LCMS化合物优化细则 1. 准备材料 准备需要优化的色谱纯标准化合物，浓度范围 0.5~1.0mg/L 准备色谱柱、流动相、甲醇溶液、废液瓶、优化用 peak 管、 小段 peak 管、三通、样品注射针、无尘纸以及无尘手套 2. 准备工作 此部分请戴无尘手套操作 用甲醇仔细清洗注射针、三通以及 peak 管 用样品注射针吸取校正用化合物溶液，擦干将针头上的溶液， 将针插入 peak 管，peak 管的另一头接到三通上，小段 peak 管也接到三通上 将针固定在蠕动泵插槽内并夹紧 将流动相一端的 peak 管也插入三通内，将小段peak管插入质 谱离子源室上的金属二通上 3.软件准备 双击打开桌面 Tuantum Tune软件，打开扫描 点击快捷条中液相泵控制按钮，打开泵控制界面，选择“Accela 1 Pump”界面，输入流动信息，点击运行按钮，此时六通阀按钮 指示 Waste 状态 点击快捷条中的注射器蠕动泵（syringe pump on/off）控制 按钮或点击菜单中的 setup 选项选择 syringe pump 打开蠕动 泵，输入蠕动泵流速，选择注射针型号及体积，然后点击 Apply 点击快捷条中的“Load/Detectot”按钮将六通阀按钮切换到 Load状态 4.质谱初试条件准备 点击快捷条中化合物优化按钮设置质谱初试条件，“Spay Voltage”介于 4000-4500，“Sheath gas pressure”介于 30-35， “Auixl Gas Pressure”介于 5-10，“Capillary Temprature” 介于 300-350 点击快捷条中扫描模式设置按钮设置扫描条件，选择“Full Scan”、“Q1MS”、“Central Mass”,输入中心离子分子量以及扫描 宽度，输入扫描时间 0.5-1，点击 Apply 在软件中可看到所需优化的化合物的分子离子峰，正离子的强 6 5 度最好能大于 e ，负离子最好能大于 5*e ，点击快捷条中总离子 流图按钮（Total Ion Current Plot）显示总离子流状态查看喷 雾是否稳定（即总离子流强度没有数量级的变化），待喷雾稳定后 点击快捷条中的化合物优化界面开始化合物优化 2 5.化合物优化 选择“MS Only”，输入化合物的分子离子峰，在右面的参数表内 选择需要优化的参数，点击 “Start”。待优化完成后点击 “Accept” （若点击 Redo 表示不接受优化参数，重新优化），跳出对话框提 问是否要保存，点击“No”。优化参数包括鞘气、辅气、喷雾电压、 Skimmer offset（一般小于 10，大部分化合物为 0）等参数，最 好手动优化。 点击“MS+MS/MS”进行二级优化,输入分子离子峰，输入电荷数为 1，在子离子内输入 3 表示寻找丰度最强的 3 个子离子，选择 “Collision Energy”进行优化，找到丰度最强的子离子及其最 佳轰击能量范围（此项最好能多优化几次，找到可重现的最佳轰 击能量范围），如果要将轰击能量保存入报告，选择 “Save report” 将结果保存（可以不存，自己记录）。 找到丰度最强的子离子后，选择“SRM”，输入母离子和子离子， 点击“Start”开始优化，优化完成后点击“Accept”，可以观察 到“SRM”优化的轰击能量和“MS+MS/MS”优化的轰击能量相似。 Tube lense offset 可采用自动优化，自动优化后优化结果上下 20 的范围内