叶绿素提取分离与理化性质.docVIP

华 南 师 范 大 学 实 验 报 告 学生姓名 何茂辉 学 号 20062501302 专 业 生物科学 年级、班级 06科三 课程名称 植物生理学实验 实验项目 实验类型 □验证 □设计 □综合 实验时间 08 年 11 月 11 日 实验指导老师 冷佳奕、黄胜琴 实验评分 叶绿素提取分离和理化性质 实验材料：大叶紫薇叶片 加入碳酸钙、石英砂、无水丙酮研磨实验操作： 加入碳酸钙、石英砂、无水丙酮研磨 称取2g大叶紫薇叶片 取少量滤液于 试管 ①荧光现象 ②光破坏作用 取少量滤液于 2支试管 分别观察反射光和透射光的一侧 分别置于强光与黑暗处3h 观察试管中溶液颜色的变化 ③铜代反应 取少量滤液于 试管 加浓盐酸至溶液出现褐绿色 用酒精灯加热，观察试管中溶液颜色的变化 ④色素分离 取10ml滤液于盛有20ml乙醚的分液漏斗中，摇动 加入30ml蒸馏水，摇动，静置片刻 弃去下层丙酮和水 用蒸馏水冲洗乙醚溶液2次 加入5ml 30﹪KOH甲醇溶液， 摇动，静置10min 加入10ml蒸馏水，摇动，静置 分离得到绿色素和黄色素溶液 分别测定390-770nm的光谱 过滤，取滤液 实验结果： 理化性质 现象 荧光现象 透射光一侧呈绿色 反射光一侧呈血红色 光破坏作用 黑暗处试管中溶液呈绿色 强光处试管中溶液呈褐绿色 铜代反应 试管中溶液颜色变化： 褐绿色→绿色 分析： 叶绿素在光照下可产生暗红色的荧光。 叶绿素的化学性质很不稳定，容易受强光的破坏， 特别是叶绿素与蛋白质分离后，破坏更快。 叶绿素中的镁可被H+取代而生成褐绿色的去镁叶绿素。 加入铜盐作用，去镁叶绿素则成为绿色的铜代叶绿素。 思考题： 为什么用80﹪有机溶剂提取叶绿素？ 由于植物叶子中含有水分，用纯丙酮提取，其提取液中丙酮最终浓度近似80﹪。 在提取叶绿素过程中加碳酸钙的作用？对量有何要求？ 加入碳酸钙只要是为了保护色素，防止在研磨的过程中被破坏。加入少许即可，若加入过多，会影响渗透压破坏叶绿素。 纸层析法分离叶绿素的原理？其中流动相和固定相分别是什么？ 利用混合物各组分在流动相和固定相两种不同溶剂中的分配系数差异，将它们分离。流动相是四氯化碳，固定相是滤纸上的水。 为什么绿色叶子中的叶绿素在光下不被破坏？ 因为绿色叶子中的叶绿素与蛋白质结合，所以不被破坏。 铜在叶绿素中取代镁的作用，有何使用意义？ 铜代叶绿素很稳定,在光下不易被破坏,故常用此法制做植物的原色标本 华 南 师 范 大 学 实 验 报 告 学生姓名 何茂辉 学 号 20062501302 专 业 生物科学 年级、班级 06科三 课程名称 植物生理学实验 实验项目 实验类型 □验证 □设计 □综合 实验时间 08 年 11 月 11 日 实验指导老师 冷佳奕、黄胜琴 实验评分 叶绿素含量的测定 实验材料：大叶紫薇叶片 实验操作： 称取0.1g 称取0.1g大叶紫薇叶片 80﹪丙酮定容至25ml 过滤，取滤液 加入碳酸钙、石英砂、无水丙酮研磨 测定OD663、 OD645 静置10min 实验结果： OD663 0.078 OD645 0.418 代入公式得出叶绿素浓度 Ca=12.7 OD663-2.69 OD645= -0.13382 mg/L Cb=22.9 OD645-4.68 OD663= 9.20716 mg/L CT=8.02 OD663+20.21 OD645= 9.07334 mg/L 代入公式得出叶绿素含量 叶绿素含量=C×25/100×1/w 物质 含量(mg/g) 叶绿素a -0.03346 叶绿素b 2.30179 叶绿素 2.268335 分析： 测定叶绿素含量的过程中造成的偶然误差过大，测得数值代入公式后得出负值，因此实验过程应尽量减少偶然误差，可做平行实验求平均值以减少误差。 思考题： 确定溶液测定光密度值时的波长依据？ 叶绿素a的最大吸收峰在663nm，叶绿素b的最大吸收峰在645nm，叶绿素a和b的吸收光谱曲线彼此有重叠。 如何计算叶绿素？表示单位？公式中k值与什么因素有关？ 根据Lambert-Beer定律，最大吸收光谱峰不同的两个