托烷司琼口腔崩解片人体生物等效性研究.docVIP

前言 呕吐是一个复杂的反射过程，主要有前庭器官，胃，十二指肠等内脏及延髓化学催吐感受区（CTZ）等传入神经冲动作用于延髓呕吐中枢而引起的。诱发呕吐的因素除胃肠道等内脏疾病外，还有前庭功能紊乱，药物（如化疗药等），放疗等因素。已知CTZ含有丰富的D2,H1,M1和5-HT3受体。 托烷司琼为外周神经元和中枢神经系统内5-HT3受体的高选择性抑制剂。抗癌药物或放疗可激发小肠粘膜的嗜铬细胞释放5-HT3，诱导呕吐反射，造成恶心和呕吐而出现脱水等不良后果。本品选择性抑制外周或中枢神经系统的突触前膜的5-HT3受体的兴奋，并可能对中枢神经系统的迷走神经传入后区有直接影响，这种双重作用阻断了呕吐反射过程中神经介质的化学传递，从而对化疗及放疗引起的呕吐有治疗作用。托烷司琼口腔崩解片是以盐酸托烷司琼为主药，加填充剂，高效崩解剂，矫味剂和芳香剂制成的一种在口腔内迅速崩解，无沙砾感，口感良好的新制剂。近年来，国内外学者对托烷司琼的人体生物等效性进行了诸多研究，这些研究成果为临床合理应用提供了坚实的理论和试验基础，但其具体的研究方法仅有为数不多的报导以及不同试验单位由于仪器等客观条件的不同，因此各研究方法也不相同。 实验部分 1.伦理学相关资料 本生物等效性试验严格遵守赫尔辛基宣言（the Declaration of Helsinki）的人体医学研究的伦理准则，临床试验方案已经伦理委员会（IEC或IRB）审核批准20名受试者随机分为甲、 乙两组 ,每组 10人。第一周期甲组口服受试制剂 2片 (相当于盐酸托烷司琼 10 mg) ,乙组口服参比制剂 2片 (相当于盐酸托烷司琼10 mg) ;第二周期甲组口服参比制剂 2片 ,乙组口服受试制剂 2片于口服前 ( 0 h)和服药后 0.33、0.5、0.75、1.0、1.5、2.0、2.、3.0、4.0、8.0、12.0、24.0、48.0由前臂静脉取血 5 mL并立即移入经肝素 处 理 的 离 心 试 管 中 , 离 心 10 min(5 000 r · min- 1) ,分离血浆 ,于 -℃冰箱中冷冻待测。 – WS低速台式离心机（长沙湘仪离心机仪器有限公司）等。 4.2试剂与药品 盐酸托烷司琼对照品由海南绿岛制药有限公司提供 (批号：080302-1 含量:99.6% )，山东益康药业有限公司生产的盐酸托烷司琼胶囊（规格：；批号：0903291– BP 5μm，4.6×150mm，ml/min。 4.4 质谱条件 离子源为API - ES源，正离子方式检测，扫描方式为选择反应监测（SIM）,用于定量的离子反应为托烷司琼母离子m/z 285，比索洛尔母离子m/z326，碰撞诱导解离120，干燥气体流速10L/min，干燥气为氮气，温度300℃，压力为40psig，毛细管电压3000V。 4.5 标准液的配制 精密称取对照品盐酸托烷司琼 10.04mg , 以少许甲醇：水（1:1）溶液溶解, 再用甲醇水溶液定容至100ml，即配制成浓度为1mg/ml 的贮备液即配制成浓度为1mg/ml 的贮备液ml置于10ml玻璃离心管中，加入含内标的乙腈溶液100μl（250ng/ml），加入0.2mol/L NaOH 100μl，涡旋30s，加入提取液（二氯甲烷：乙醚=2:3）3ml, 涡旋4min，于3500r/min离心10min，精密取上清液2ml，在45℃水浴下通氮气吹干，残留物加流动相200μl溶解， 吸取20μl进样LC-MS测定。 4.7 色谱图 图1、2、3、4、5分别为空白血浆（6个不同来源）色谱图、空白血浆加对照品色谱图、空白血浆加内标物色谱图、空白血浆加对照品和内标物及受试者服药后 3h血浆样品色谱图。从图中可以看出，托烷司琼的出峰时间约为4~5min，比索洛尔的出峰时间约为6~7min。托烷司琼、比索洛尔与血浆中内源性物质分离良好。  图1 盐酸托烷司琼质谱图 图2 富马酸比索洛尔质谱图  图3.空白血浆总离子流图（分别作6个不同样本） 图4. 托烷司琼对照品总离子流图 图5. 空白血浆加对照品加内标物总离子流图 图6. 空白血浆加对照品加内标物总离子流图 图7. 受试者服药后 3.0h血浆样品外加内标物总离子流图 4.8 线性范围及最小检出浓度 用空白血浆配制相当于托烷司琼浓度分别为1.0、2.0、4.0、8.0、16.0、32.0、64.0ng/mL的样品，按“血浆样品处理”项下操作，记录托烷司琼和内标物的峰面积，以托烷司琼样品浓度(ng/ml)对托烷司琼峰面积A1与内标物峰面积A2的比值作直线回归，线性方程：Y=43.715X-0.2977，线性范围为1.0---64.0ng/ml, 相关系数 R2＝0.9988（图6 ）。 标准曲线重复测定如下：