巴戟天不同农家类型种质资源的RAPD分析.PDFVIP

维普资讯 · 栽培与育种 · 巴戟天不同农家类型种质资源的RAPD分析 丁 平，徐吉银，楚桐丽 (广州中医药大学中药学院，广东广州510405) 摘要 目的：探讨不同农家类型巴戟天在分子水平上的遗传多样性。方法 ：利用分子生物学技术中随机扩增 多态性 DNA(RAPD)技术对巴戟天5个不同农家类型的种质资源进行检测。结论 ：40个随机引物中有 l4个引物 扩增产物具多态性，每个多态性引物平均可扩增出3—5个片段。聚类分析表明，全部材料可分为两大类 ，其中大 叶种聚为一类，小叶种单独为一类。结果：不同农家类型巴戟天种质资源在分子水平上存在明显的遗传差异。 关键词 巴戟天 ；RAPD；遗传多样性 ；DNA指纹图谱 中图分类号 ：R282．2 文献标识码 ：A 文章编号：1001—4454(2006)0l-0001-03 茜草科巴戟天MorindaofficinalisHow的根，具 实验步骤作了改进。植物叶片经蒸馏水洗净后剪 有补。肾壮阳、强筋骨、祛风湿之功效。2000年在广 碎，在钵体中用液氮冷却碾碎成细粉。取 100mg加 东省德庆县高良镇建立规范化种植基地，发现有：玻 入6倍预热至60cc的CTAB提取缓冲液，10 1Pro— 璃薯、萝 b薯、光管薯、长茎薯、豆角薯等多个农家类 teinaseK，4 lRNaseA及 10 l2一ME水浴温育 30 型，其药材形态和植物外形都存在较大的差别…。 min。加入等体积抽提液 (氯仿：异丙醇 =24：1)抽 为了弄清巴戟天不同种质资源的来源及其遗传特 提，15000g离心10min。取上清液加2／3体积的异 性，采用DNA指纹图谱技术作了分析。 丙醇及 1／10体积的3mol／LNaAc，完全混匀，0cc放 1 材料及仪器 置20min，以10000g离心 10min，弃上清，用80％ 样品于2003年6月采 自广东省德庆高良镇规 和70％乙醇洗DNA两次，室温干燥 30rain，加适量 范化种植基地的不同的农家类型，有：小叶种 (xi- TE缓冲液溶解DNA，存于4~C保存待用。取5 l提 aoye．1)，大叶种包括：光管薯 (dayegg-3)、玻璃薯 取的DNA于0．8％琼脂糖凝胶(含 1 mlEB)上， (dayebl-4)、长茎薯 (dayecj-5)、豆角薯 (dayedj-7)的 用0．5XTBE电泳缓冲液在 10V／cm 电泳 1h后，琼 幼嫩叶片，以硅胶快速干燥保存。凭证标本存于广 脂糖凝胶上的DNA谱带通过 EB染色后，在紫外光 州中医药大学中药资源研究室。 下检测DNA片段长度。DNA检测后置于一20cc冰 试剂：TaqDNA聚合酶购 自中国科学院遗传研 柜内长期保存。 究所，dNTP、Tris、Buffer、i3-巯基乙醇、Marker、随机引 2．2 引物筛选 本试验选用上海生工公司生产的 物(见表 1)等购 自上海生物工程有限公司。仪器： 40个寡核苷酸随机引物，对供试样品的混合模板 PCR扩增仪 (PerkinElmers公司产的PE-480型)， DNA进行扩增，根据扩增结果筛选出14个扩增图 Ultrospec3300pro型紫外．可见 分光 光度计， 带数多、且清楚的随机引物，用于全基因组 DNA多 UVPGDS．8000型凝胶 自动成像系统。 态性RAPD标记。 表 1 引物序列 2．3 RAPD扩增反应 采用25 1PCR反应体积： 反应液中含 1×PCRbuffer、1．9mmol／LMgC12、4种 dNTP各0．1mmol／L、2．5U／100ulTaqDNA聚合