杂花苜蓿抗匍柄霉叶斑病的SRAP标记分析.PDFVIP

杂花苜蓿抗匍柄霉叶斑病的SRAP标记分析 周良彬,卢欣石,王铁梅,王红柳，徐大伟 (北京林业大学草地资源与生态实验室，北京 100083) 摘要 本研究对 31 份杂花苜蓿(Medicago varia Martin.)材料的匍柄霉叶斑病抗病性进行 了田间调查评价，并结合 SRAP(Sequence-related Amplified Polymorphism)标记，对杂花苜蓿 的抗、感病种质进行了标记连锁分析，其结果对杂花苜蓿引种、抗病品种的选育等具有一定 意义。结果显示：31 份材料的发病率在 25.1 ％～98.57 ％，病情指数在 13.24％～70.1 ％之间， 其中来自哈萨克斯坦和新疆两个地区的 6 份种质表现出较好的抗病性，1 号、6 号和 8 号材 料等共计 9 份材料表现出较高的感病性; 筛选出 5 对引物作为抗匍柄霉叶斑病基因连锁标记 分析的重点分析引物,初步发现两个与匍柄霉叶斑病抗性基因紧密连锁的分子标记，分别命 名为 F14-r14450 和 Me1-r14500 ，其可以用来进一步鉴定具有匍柄霉叶斑病抗病性的优良种质。 关键词 杂花苜蓿；匍柄霉叶斑病；抗病性；SRAP 近年来，苜蓿(Medicago)病害已成为苜蓿生产的主要限制因素之一，对苜蓿草地生态系 统中的植物生产层、动物生产层和外生物生产层产生影响，导致部分苜蓿草地提前衰败，从 而影响草地畜牧业的可持续发展。苜蓿匍柄霉叶斑病(stemphyllium leaf spot),又称苜蓿轮班 病，广泛发生于世界各苜蓿种植区[1] 。我国的吉林、内蒙古、甘肃、新疆、宁夏、江苏、贵 州等省（自治区）有发生，属于苜蓿常见的 8 种病害之一，并将该病同锈病、霜霉病、褐斑 病并列为我国普遍发生、危害较重的病害[2] 。由于该病危害大、流行广，引起了世界许多国 家学者的极大关注 [3-6] ，但我国对该病的研究较少。 杂花苜蓿(Medicago varia Martin.) ，因其群体高度杂合，抗病选育较困难，传统的田间 病情调查筛选工作量大，耗时长，难以高效率地筛选出大量抗性种质[7] 。而基因标记技术可 以筛选与目的基因紧密连锁的遗传标记，分子标记辅助选择可以对苜蓿匍柄霉叶斑病抗性进 [8-12] 行高效准确的鉴定和筛选，加快育种进程 。 本研究在实验室前有研究的基础上，采用田间调查评价法，对材料的匍柄霉叶斑病抗病 性进行评价，并结合 SRAP 标记，对杂花苜蓿的抗病性进行标记连锁分析，其结果对杂花苜 蓿引种、抗病品种的选育及探讨其抗病性与遗传多样性之间的关系具有一定意义。 1 材料和方法 1.1 试验材料 供试材料为 31 份杂花苜蓿资源，种子来源于中国新疆、波兰、乌克兰及哈萨克斯坦等 国家（表 1），试验材料均种植于北京林业大学草业科学学科顺义实验基地。供试菌株为苜 蓿匍柄霉叶斑菌（Stemphylium botryosum Wallr ），从田间采取的病叶上分离、纯化，经致 病性测定后备用。 1.2 田间抗病调查 定点调查 31 个品种，每个品种调查 10 株，每株调查 3 个枝条，每个枝条自上而下随 机调查 20 片叶，以病情指数和发病率为指标进行调查统计，病害分级标准在北美苜蓿会议 [13] 的基础上略有改动。 （NAAIC ）苜蓿品种匍柄霉叶斑病的测试标准 以各品种病害的病情指数和发病率来评价其抗病性，田间抗病性评价的病害分级标准 如下（参照北美苜蓿会议（NAAIC ）苜蓿品种匍柄霉叶斑病的测试标准）： 0 级：植株健康，顶端正常生长，无病斑出现，叶片呈现正常的绿色，没有任何病斑； 1 级：斑点直径1mm,为褐色、黑色或胡椒状斑点，病斑占叶面积 5 ％以下； 2 级：3mm ≥斑点直径1mm ，病斑占叶面积 6 ％～20 ％，叶片通常没有变色和脱落； 3 级：斑点直径3mm ，病斑占叶面积21 ％～50%，病斑呈环状，叶柄处可能有病斑； 4 级：斑点直径3mm ，病斑占叶面积 50% 以上，变色落叶，病斑中央产生/不产生子实 体。 发病率（普遍率）＝发病的叶片（株）数/调查的总叶（株）数 × 100%