超速离心法快速分离制备血清脂蛋白.pdfVIP

生 物 医 学 工 程 研 究 20l0 JournalofBiomedicalEngineeringResearch u。●29(3)：’22‘l1～～222 超速离心法快速分离制备血清脂蛋 白 贾凤玉 ，余兴明△，孟建中 (济南军区总医院血液净化中心，济南250031；2．中科院上海生化细胞所，上海200072) HitachiCS一150GXL微量超速离心机 1 引 言 (2)转头和离心管：S140AT：140，000rpm，l， 为了生物及医药方面研究的需要，研究者常需 050，000×g，10×2ml，K=5，1PC厚壁管。 制备脂蛋 白纯品，采用的方法有超速离心法、化学沉 S80AT3：80，000rpm，415，000 ×g，8×8ml，K= 淀法(如硫酸右旋糖苷沉淀法)、凝胶过滤和高压液 23，6PC厚壁管。 相层析法等。迄今为止，采用密度梯度超速离心分 S70AT：70，000rpm，505，000 ×g，8×40ml，K= 离纯化各种脂蛋 白仍是纯度较高、简便实用的好方 44，40PA管。 法 。 3 离心操作 超速离心法可分为制备型和分析型两种，制备 型密度梯度离心法可以分为等密度离心法和速率一 3．1 血浆一血球分离 区带密度梯度离心法，可以选用的转头有角头、甩平 全血，角转头或甩平转头 3000rpm×20min，沉 头 、垂直头和区带头 。我们介绍的方法利用不 同容 淀为血细胞，上清血浆待用。 量的角式转头及简单配制的梯度液，在各种型号的 3．2 乳糜微粒分离 超速离心机上快速分离血清脂蛋 白，可 以得到满意 离心参数：各种转头均可用，4×106(g×min)， 的分离效果。 10℃ 。 梯度液：离心管下部 3／4容积为血浆，上部 1／4 2 材料和仪器 容积为0．15MNaCl+0．3MEDTA，pH7．4。 2．1 梯度液… 离心结果：乳糜微粒上浮，离心管倾斜，吸管贴 A液 ：11．40gNaC1，0．1gEDTA—Na2，置于 1000 管壁慢吸出(约 占血浆容积的2％一6％)。 rnl量筒中，加入 500ml重蒸水及 1ml1NNaOH，混 表 1 极低密度脂蛋 白(VLDL)~离 (pi．o06~／on3) 匀至全部溶解 。加重蒸水至 1000ml最后再加 3rI1l 转头 离心管 内液体分布 离心参数 结果 重蒸水 (NaCI：0．195mo1)。终密度 1．O06g／cm~，pH 10．37。 B液 ：力Ⅱ24．98gNaBr至U100mlA液 中 (NaC1： 0．195mol，NaBr：2．44mo1)。终密度 1．182g／cm3， pH9．72。 C液：加 78．32gNaBr到 100mlA液 中 (NaC1： 0．195mol，NaBr：7．65mo1)。终密度 1．478g／cm3， pH8．86。 2．2 离心机 、转头、离心管 (1)离心机 ：HitachiCP—MX系列超速离心机或 其他类似机组 。 △通信作者 Email：jiafengyu2006@126．com 222 生 物 医 学 工 程 研 究 第 29卷 注意：禁食 12h以上供血者血