连续细胞培养诱导骨髓间充质干细胞分化.pdfVIP

· 262 · 医学研究生学报2016年3月 第29卷 第3期 JMedPostgra，Vo1．29，No．3，March，2016 论 著 (基础研 究) 连续细胞培养诱导骨髓间充质干细胞分化 闵 波，焦 峰，赵一奇，邱 亮，孙 龙 [摘要】 目的 骨髓间充质干细胞 (bonemesenchymalstemcells，BMSCs)能够在多种诱导条件下向血管平滑肌细胞 (vascularsmoothmusclecells，VSMCs)方向分化。文中通过采取连续细胞培养的方式，探讨能否体外诱导BMSCs向VSMCs分 化。 方法 采用全骨髓贴壁的方法将 BMSCs从骨髓 中提取 出，并进行体外扩增，流式及三系分化验证 BMSCs。将 BMSCs 随机分为实验组和对照组，实验组采取连续细胞培养的方法，中途不换液，而对照组采取常规方法培养，每2天换液 1次。将 BMSCs连续培养5d后 ，通过免疫荧光、Westernblot、Real-timePCR等方法测定VSMCs的特异性标志物。 结果 BMSCs阳 性表达 CD29、CD90，而阴性表达 CD45、CD34、CD49d，而且经成骨、成脂和成软骨诱导后 ，茜素红、油红 、阿辛蓝染色均呈阳性。 通过连续细胞培养5d后 ，实验组细胞的仅一SMA、Calponinl的蛋白表达水平均较对照组明显增高[(0．84±0．04) (0．19± 0．02)、(0．87±0．03)s(0．05±0．06)，P0．01]，且免疫荧光实验阳性。实验组较对照组 0一【SMAmRNA、CNN1mRNA、 SM—MHCmRNA、SM22mRNA表达升高[(9．33±0．14) (1．00±0．18)、(12．64±0．23) (1．00±0．17)、(4．75±0．28) (1．O0±0．23)、(10．26±0．29)US(1．00±0．22)]，差异有统计学意义 (P0．01)。 结论 在缺乏外源性刺激的情况下 ，通 过采取连续细胞培养的方式，可成功诱导BMSCs向VSMCs分化。 【关键词】 间充质干细胞；血管平滑肌细胞；分化；连续细胞培养；再狭窄 【中图分类号】 R541 【文献标志码] A [文章编号】 1008—8199(2016)03-0262-06 [DOI】 10．16571／j．cnki．1008．8199．2016．03．008 Differentiationofbonemarrowmesenchymalstem cellsinducedbycontinuouscellculture MINBo，JIAOFeng，ZHAOYi—qi，QIULiang，SUNLong (DepartmentofCardiothoracicSurgery，the82stHospitalof A，Huaian223001，Jiangsu，China) [Abstract] objective BonemalTowmesenchymalstemcells(BMSCs)canbeinducedtothedifferentiationintovascular smoothmusclecellsinmanyinductionconditions．Wesoughttoexplorethepossibilityofthedifferentiationofmesenchymalstem cells intovascularsmoothmusclecellsbycontinuouscellcultureinvitro． Methods RatBMSCswereisolatedfromthebilateraltibial and femoralbonesbythemethodofwholebonemaiTowadherence，followedbyexvivoexpansion．BMSCswereidentifiedbyflow cytometry andthree．1ineagedifferentiation．AftercontinuousfivedayscellcuhureofBMSCs，thespecificsurfaceantigensofVSMCsweredetec— tedbyimmunofluorescenee，westernblotandreal—timePCR． Results BMSCsexpressedCD29、90，incontrast，theydidnotexpress CD45、34、49d．Aft