重组甘精胰岛素的可溶性表达研究.pdfVIP

东 南大 学学 SoutheastUniv JSoutheastUniv舞(Med医Sc学iEE版ddi)；2。…13，’一。ec；’32、(6)：’6…63-669 6·63· 重组甘精胰岛素的可溶性表达研究 甘子仪，华子春 (南京大学 医药生物技术国家重点实验室，江苏 南京 210093) [摘要]目的：构建甘精胰岛素(ING)表达载体，提高ING在大肠杆菌中的可溶性表达。方法：在传统方法中 ING的A、B链之间用C肽连接，本实验在 ING的A、B链之间插入大肠杆菌硫氧还蛋 白质 (Trx)来替代 c 肽，进行ING的融合表达(ING。Trx)，并进一步使用多分子伴侣 GroEL、GroES、触发因子进行共表达。结果： 可溶性的ING—Trx融合蛋白约占该 目的蛋白质总表达量的35％；多分子伴侣共表达后可溶性ING-Trx的产 量提高到ING-Trx总蛋白的78％，初步纯化后其产量为4．5mg·L～，是使用分子伴侣前的3倍。结论：用 Trx代替c肽不影响A、B链的有效折叠，采用分子伴侣共表达可以显著提高目的蛋白的可溶性。 [关键词]甘精胰岛素；多分子伴侣；共表达 [中图分类号]Q578；Q786 [文献标识码]A [文章编号]1671-6264