p450s在植物甾体代谢中的功能和进化研究.doc

Insights into the function and evolution of P450s in plant steroid metabolism Phytochemistry 70 (2009) 1918–1929 《植物化学》2009年第70期1918-1929页 P450s在植物甾体代谢中的功能和进化研究 作者：Toshiyuki Ohnishi, Takao Yokota, Masaharu Mizutani文章信息： 1.文章历史：接收2009年9月3日，通过2009年9月15日，在线出版2009年10月8日 2.关键词：油菜素内酯 细胞色素P450甾体 三萜 皂苷 摘要：已知很多细胞色素P450单氧化酶参与三萜和甾体的生物合成和代谢。这篇回顾性文章将会对P450s催化的氧化反应进行全面考察，并且对植物界中甾体生物合成基因的进化进行研究。特别要指出的是油菜素内酯，植物甾体类激素，在植物生长和发育调控中扮演着不可或缺的角色。油菜素内酯生物合成和分解过程中涉及到的几种P450s最近已经通过蛋白重组实验而确定，展示了一条新型的油菜素内酯生物合成途径。 综述 在植物中，三萜类化合物和甾体类化合物是非常重要的次生代谢产物。已知许多细胞色素P450单氧化酶参与三萜类和甾体类化合物的生物合成和代谢。这篇文章研究像P450s一样对甾体化合物合成有重要作用的物质，这些甾体化合物包括甾醇，油菜素内酯，甾体皂苷，孕酮和有强心作用的甾体，还有植源性蜕皮激素以及三萜皂苷等。 在它们之中应特别重视的是广泛存在于各种植物（藻类，蕨类，裸子植物和被子植物）中的植物甾体类激素油菜素内酯。油菜素内酯是通过植物细胞中的环木菠萝甾醇合成的，环木菠萝甾醇来源于三萜角鲨烯循环。自从1979年分离出油菜素内酯后，菜油甾醇中的油菜素内酯的生物合成就已经利用人工培养的长春花细胞被广泛研究。20世纪90年代，几种油菜素内酯的合成突变体在拟南芥，番茄，水稻，豌豆和其它物种中被发现。这些突变体表现出严重的矮化，这些突变体的这种特征为油菜素内酯是调节植物生长和发育必不可少的激素提供了更加令人信服的证据。这些突变体的遗传分析也有利于油菜素内酯合成基因的分离，这些基因中的许多都被显示编码P450s。这些P450s包括从组成型光型态建成和矮化植株分离出来的CYP90A1，从dwarf4中分离的CYP90B1，从拟南芥rotundifolia3中分离的CYP90C1，从番茄dwarf中分离的CYP85A1，从油菜素内酯缺失突变体dwarf1和油菜素内酯依赖型突变体1中分离的CYP85A1，从ebisu dwarf中分离的CYP90D2以及从水稻dwarf11中分离的CYP724B1。已经确定的P450s的酶功能错误的被认为依赖于一些间接证据，如生物合成突变体中内源油菜素内酯的含量，或者挽救矮化症状的生物合成中间体的合成效率。然而，最近的生化和功能定性毫不含糊的揭示了这些P450s的功能。基于这些结果，我们推测出了油菜素内酯新的生物合成途径。此外我们还讨论了植物界中P450s生物合成途径的进化演变。 在这篇文章的最后部分，我们将会讨论各种植物甾体和三萜类化合物生物合成途径中的P450依赖型反应。 油菜素内酯的化学性质和分类 目前，超过70种的油菜素内酯已经被鉴定（图1）。油菜素内酯被定义为在C-3位有一个氧基团，另外在C-2，C-6，C-22和C-23位有一个或几个氧基团的甾体类化合物。根据侧链C-24位的烷基基团不同，油菜素内酯可分为C27（没有烷基），C28（α-或者β-甲基），或者C29（α-乙基）。植物中最丰富且广泛存在的油菜素内酯为C28型甾体。1979年，BL，生物活性最高的油菜素内酯类化合物作为生长促进因子从花粉中分离出来。1982年，栗甾酮（CS），BL的直接前体，从板栗的虫瘿中分离出来。随后，各种油菜素内酯从单子叶植物，双子叶植物（不完全化，离瓣花，合瓣花），以及裸子植物中分离出来。油菜素内酯也从低等植物中分离出来，如蕨类植物（木贼属低等植物，荆），苔藓植物（地钱）和藻类植物（水网藻），但是并没有报道任何产生油菜素内酯的真菌。油菜素内酯目前存在于各种植物器官（茎，叶，花粉，以及种子），在正在生长的部分尤其丰富，花粉/花药和未成熟的种子。 油菜素内酯的生物合成 常规途径（氢化菜油甾醇（CN）依赖途径） C28BRs，CS和BL是通过植物甾醇菜油甾醇（CR）合成的。CS和BL的生物合成途径已经通过跟踪稳定同位素标记的长春花细胞悬浮培养液和拟南芥幼苗的中间转换产物而明确研究（图2）。结果，人们发现BR生物合成的初始阶段是从CR形成CN。此外，CN被证明是通过平行的分支途径来代谢的，即前期和后期C-6氧化途径。在前期C-6氧化途径中，CN被氧化成6-O-氢化菜油甾醇