进出口食品中沙门氏菌快速检测方法-.docVIP

《进出口食品中空肠弯曲菌药物敏感性的测定》编制说明 任务来源 本标准是根据国家认证认可监督管理委员会国认科函[2009]132号文下达的任务，2009B170，计划项目名称为《进出口食品中空肠弯曲菌的测定》。本标准由江苏出入境检验检疫局牵头，江苏省动物卫生监督所空肠弯曲杆菌(Campylobacter jejuni，C.jejuni)。空肠弯曲菌属于螺旋菌科弯曲菌属，为革兰氏染色阴性的弧菌，被认为是人类主要食源性病原菌之一因此中的具有十分重要的意义。传统检测方法，由于其检测周期长、程序复杂、所需试剂繁多等缺点已远远不能满足现代检测要求。随着现代科学技术的不断发展，特别是免疫学、生物化学、分子生物学的不断发展，人们已创建了不少快速、简便、特异、敏感且适用的检测方法(NCCLS)对药敏实验的程序等做详细说明，但国际上没有一个弯曲菌公认的抗生素敏感性测定标准。2002年6月，NCCLS推荐琼脂稀释法测定弯曲菌耐药性。但欧洲人兽共患病参考实验室仍没有明确测定方法[3]，这也导致在测定方法和结果上存在差异[6]。 一些研究者对上述测定方法进行了比较。Frediani-Wolf和Stephan[9]应用纸片扩散法、E-test和微量稀释法分析了空肠弯曲菌分离株的抗生素敏感性和耐药性，发现纸片扩散法是一种可信度高、简单易行的方法，E-test和琼脂稀释法适合于小规模、单一地区分离株的分析，微量稀释法是大规模耐药性分析的首选方法[7]。与这些研究不同的是，Ge等认为不同抗生素的评价指标应多样化[6]。 现代分子技术的应用为细菌分离株耐药性测定提供了又一方法，但这一技术依赖于对相关耐药基因的分析。错配扩增突变分析PCR法（MAMA-PCR）和荧光定量突变法[5，10]等分子技术已成功应用于环丙沙星耐药性空肠、结肠弯曲菌的检测，弯曲菌gyrA基因Thr-86-Ile位的突变与环丙沙星耐药性相关。多列探针检测法（line probe assay）也被应用于空肠、结肠弯曲菌对苯二酚和大环内酯类耐药性的同时检测[11]。 分子生物学方法的最大优势是不需要培养微生物可直接从样品中检测到突变基因，尤其对困难的微生物和大规模耐药性分析；主要缺点是对新的突变基因无法检测，及对每一个抗生素要分开检测。因此，通常将表型和基因型方法结合来测定耐药性。 人弯曲菌临床分离株的耐药性监测 欧洲 2005年9月，弯曲菌和幽门螺杆菌等相关病原微生物国际会议在欧洲召开，会上交流了最新的细菌耐药研究进展。Gallay开展了较为详细的弯曲菌耐药性研究[12]，417家研究机构共分离了4090株，总体耐药性以下：红霉素少于5%、四环素31%、氨苄青霉素39.2%，结肠弯曲菌耐药均高于空肠弯曲菌，萘啶酮酸耐药率分别为39.9%和27.2%，庆大霉素没有耐药性。 在德国也有类似研究，Krausse和Ullmann对367株空肠、结肠分离株进行耐药性分析[13]，抗生素包括6种氟喹诺酮类、2种大环内酯类和四环素，加替沙星、莫西沙星最敏感（MIC90 4mg/l），环丙沙星MIC90 32mg/l，另外，研究显示，38%的分离株至少对一种氟喹诺酮类抗生素耐药，14.4%的分离株对所有对苯二酚类抗生素耐药，四环素耐药明显增加，从1999年的22.3%到2004年41.9%。 新西兰 弯曲菌感染是最常见的指定监测的疾病，但在抗生素监测方面的信息相对较少。奥克兰的一项研究在对202株肠道分离株（多种微生物）耐药性的分析显示[14]，对庆大霉素无耐药性，对强力霉素、红霉素和环丙沙星的耐药性分别为1%、1.5%和2.5%，3年后，对同一地区的200株分离株的研究显示，红霉素耐药性空肠弯曲菌较非空肠弯曲菌要低，15株空肠弯曲菌分离株中3%的产生了红霉素耐药性，而非空肠弯曲菌达到40%。 澳大利亚 Korolik等[15]收集了1989-1990年和1994-1995年期间的人源空弯分离株81株和79株、结肠8株和6株，在2次实验中，空肠弯曲菌红霉素耐药从44%下降至5%、结肠从50%下降至33%，强力霉素耐药率分别从10%下降至2.5%、25%至16%，恩诺沙星没有产生耐药性。Huysman和Tumidge[16]对100株分离株的分析表明，所有菌株耐药性较轻，敏感的有红霉素、庆大霉素、萘啶酮酸和环丙沙星，9株分离株对四环素耐药。 日本 Itoh等分离了245株空肠弯曲菌[17]，其中，111株来自1979年-1982年间腹泻人群、134株分离自牛、禽和野禽；72株结肠弯曲菌，其中，18株来自人群、54株分离自猪，并测定了APC、EM、CO、TC、AMK、GM、KM、CER、NA等9种抗生素的耐药性，所有人源空肠弯曲菌分离株对APC、EM、CP、AMK、GM、KM和NA敏感，CER的MIC