板栗疫病菌致病性机理的双向凝胶电泳法研究-广西植物.PDF

维普资讯 广 西 植 物 Guihaia 28(1)：117— 120 2008年 1月 板栗疫病菌致病性机理的双 向凝胶 电泳法研究 姜明国1一，何小丹1，裴 氏秋河 ，江欢欢1，黄永颜1，陈保善1，2，3* (1．广西大学 生命科学与技术学院，南宁530005；2．广西亚热带生物资源保护与利用重点实验室，南宁 530005；3．微 生物及植物遗传工程教育部重点实验室，南宁 530005；4．广西民族大学 化学与生态工程学院，南宁 530007) 摘 要：双向凝胶电泳技术是蛋白质组学研究的基础性技术平台。如何得到一张高质量的双向凝胶电泳图 谱是进行后续研究的关键 。为探索适用于板栗疫病菌可溶性总蛋白的最佳提取条件，从蛋白组学角度来探索 板栗疫病菌致病性机理，比较 了目前在丝状真菌中常用的两种蛋 白质提取方法，制备的蛋白质样 品经双向凝 胶电泳后，在凝胶上呈现的蛋 白质斑点的丰度和分布特点。结果表 明，两种方法获得的蛋白质主要集中分布 在 pH4～7的范围内；TCA一丙酮沉淀法得到的图谱分辨率高但是蛋白质总量很少 。裂解液一TCA一丙酮沉淀法 得到的蛋白质总量较大，通过 cleanupkit处理后图谱分辨率可以达到差异蛋白组的要求。随机提取几个银染 蛋白点用 MALDI—TOFMS／MS进行分析 ，可以得到高质量的肽质量指纹谱 。表明该样品制备方法可以满足 蛋 白质鉴定的要求。 关键词：蛋 白质提取；双向凝胶电泳 ；蛋白质组；板栗疫病菌 中图分类号 ：Q945．8 文献标识码：A 文章编号 ：1000—3142(2008)01-01l7一O4 StudyonthepathogenicityofCryphonectria parasiticaby2-DE JIANGMing-Guo一，HEXiao—Dan ，PEISHIQiu—He1，JIANG Huan-Huan1， HUANG Yong-Yan1．CHEN Bao—Shan1，2，3* (1．ColleKeorLifeScienceandTechnoloKy，Nanning530005，China；2．GuangaiKey，aborator3o，Subt~opicalBioresourceCon一 8ervatiollandUtili：ation，Nanning530005，China；3．KeyLaboratoryo／MinistryofEducationforMicrobialandPlantGenetic EnKineetiwg，GuangribS*i ，sit3，Nanning530005，China；4．GuangxiUniversityforNationality，Nanning530007，China) Abstract：Comprehensiveproteinextractionfrom Cryphonectriaparasitica isakeysteptoachievehighqualitypro— teinseparationintwodimensionalelectroDhoresis(2一DE)．Tworoutinecellulartotalproteinextractionmethodswere comparedinordertOdetermineanoptimaloneforfilamentousfungi．Thentheextractedtotalproteinsweresubjected to2-DE，andthebetterextractionmethodwasdeterminedbytheindexesofprotein distributionandabundanceon correspondingsilver-stainedge1．Datashowedthatmostproteinsweredistributed inthepH rangingfrom 4t