基因工程菌的发酵研究.pdfVIP

《生物工程进展》1997, . 17, . 2 V o l N o 基因工程菌的发酵研究 李会成　李文辉　郭　军　刘利民 ( 哈尔滨市医药工程技术研究开发中心　150020) 摘要　本文对大肠杆菌表达的 rh GM - C SF 工程菌的发酵条件进行了详细的研究, 探讨 了发酵条件对工程菌表达外源蛋白量的影响, 优化了影响发酵的各种条件, 形成了一套工 程菌发酵表达外源蛋白的工艺, 并从工业化角度对工程菌的高密度高表达间的关系进行 了探讨。 关键词　工程菌发酵　外源蛋白　高密度　高表达 　　利用基因重组技术构建的生物工程菌的发 12 3　发酵采用美国 公司的 40 发酵 N B S L 酵工艺不同于传统的发酵工艺, 就其选用的生 罐, 按操作说明书操作。 物材料而言, 前者含有带外源基因的重组载体; 12 4　菌体测量采用称重法和浊度法。 而后者是单一的微生物细胞; 从发酵工艺考虑, 12 5　950 1 批发酵不添加任何营养物, 9502 生物工程菌的发酵生产之 目的是希望能获得大 批, 高密度发酵都采用流加工艺, 补加有机营 量的外源基因产物, 尽可能减少宿主细胞本身 养。9502 发酵 8 小时, 其中生长 5 小时, 表达 3 蛋白的污染, 外源基因的高水平表达, 不仅涉及 小时, 高密度发酵周期为 8 小时, 其中生长 6 小 宿主, 载体和克隆基因三者之间的相互关系, 而 时, 表达 2 小时。 且与其所处的环境条件息息相关, 因此仅按传 　　二、发酵条件的优化 统的发酵工艺生产生物制品是远远不够的, 需 要对影响外源基因表达的因素进行分析, 探索 2 1　发酵用菌种的筛选 ( ) 中加入细菌培养用琼脂 15 铺平 出一套适于外源基因高效表达的发酵工艺。 LB g L 皿, 用接种环划线接种甘油管菌种, 30 ℃培养过 　　一、材料与方法 夜, 挑取单菌落接种于含 5 (含 50 m l LB g m l 11　材料 A m p ) 的试管 中, 30 ℃培养到 OD 600 为 02 - 08, 取 1 于另一试管中42 ℃培养 3 小时, 离 重组工程菌系本所保存, 宿主菌为 . m l E co li