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成 都 医 学 院 教 案 首 页 2009 级 生物技术专业 任课教师：殷建华 课程 微生物学实验技术 题目 土壤中产纤维素酶菌株的筛选 学时 讲授 实验 3 练习 行课时间 2011年12月29日第6－8节 课次 第8次 教 材 《微生物学实验》， HYPERLINK /authors/%D1%EE%BD%A8%D0%DB \t _blank 赵斌，何绍江主编，科学出版社 教 具 教 学 目 的 要 求 1.掌握从环境中分离筛选纤维素酶产生菌的原理和方法； 2.熟悉选择培养基的原理和制备方法。 3.了解筛选特定菌株的实验方案的设计程序。 教学重点 难点及其 解决方案 教学重点: 选择培养基的原理和制备方法 教学难点: 选择培养基的原理和制备方法 解决方案：通过实验学生反复训练，对于最后的实验结果教师举例进行分析 参 考 资 料 [1] 钱存柔，黄仪秀. 微生物学实验教程. 北京：北京大学出版社，1999. [2] 沈萍编. 微生物学实验. 北京：高等教育出版社，2002. 实 施 情 况 小 结 教研室主任签名： 2011年9月10日 成 都 医 学 院 教 案 续 页 教学过程、内容及时间分配 教学方法与手段 实验八 土壤中产纤维素酶菌株的筛选 一、实验原理（20分钟） 微生物对大分子的纤维素﹑淀粉﹑蛋白质和脂肪不能直接利用，必须靠 产生的胞外酶将大分子物质分解才能被微生物吸收利用。胞外酶主要为水解酶，通过加水裂解大的物质为较小的化合物，使其能被运输至细胞内.如纤维素酶水解纤维素为小分子的糖，细菌菌落在固体培养基上会形成水解斑，从而据此判断细菌能否分解纤维素。 二、实验器材及方法 实验器材：（5分钟） 1、培养基：羧甲基纤维素钠培养基 羧甲基纤维素钠 10g，氯化钠 5g，磷酸二氢钾氯化钠 1g，蛋白胨 10g 酵母粉蛋白胨 10g，琼脂粉20 g，水1000ml，pH自然 2、土壤样品 实验方法： 1、培养基的制备 （30分钟） 以羧甲基纤维素钠为惟一碳源制备平板培养基，筛选纤维素酶产生菌。 2、土壤的采集 在学校的灌木丛下，有腐烂树叶的土壤里采集土样，放置于装有5毫升灭菌水的试管中，震荡混匀。 3、涂布平板与培养（20分钟） 取试管中的液体1毫升，以等梯度依次稀释到10-1，10-2，10-3，10-4，10-5，10-6，10-7，取10-4，10-5，10-6，10-7稀释倍数的土样液体0.2毫升分布加入平板中涂布。然后放入37℃培养箱培养48小时后观察。 4、挑取纤维素酶产生菌（20分钟） 测量平板中菌落的透明圈及菌落的直径，并计算Φ透明圈/Φ菌落，挑选比值大的菌落转接平板培养。 5、纤维素酶产生菌的生物学特性观察（25分钟） 菌落形态，革兰氏染色。 三、关键步骤及注意事项 注意无菌操作。 讲授法 讲授法 强调惟一碳源的原理 讲授法