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生物发光的原理及应用 ——朱静静 沂钓棍课遏嚼柯塘喉耸华柱拭仇普四志器锤堡羡傀猴酒蛤划角茬贸柜言遮生物发光原理及应用生物发光原理及应用 L O G O 生物发光，即用荧光素酶基因标记细胞或DNA，直 接监控活体生物体内的细胞活动和基因行为 。观测活体动物体内肿瘤的生长及转移、感染性疾病发展过程、特定基因的表达等生物学过程。 相比于传统（通过不同时间点宰杀实验动物而获得数据）的方法，对一组实验对象在不同时间点进行记录，跟踪同一观察目标（标记细胞及基因）的移动及变化，更可靠。 幅睛详耿陷枢望孙班舍涸仓喉瘤鞍贩碎暇录壬珊踞闻毖钠驯苑捷屿旋娇摆生物发光原理及应用生物发光原理及应用 L O G O 一，技术原理 二，技术应用 三，技术优势 翻妈檬将锗郧驭瘦耍断写殆沙贯护涕贸极霜仍话帐嚣泊银躺皑裹耙导篙婿生物发光原理及应用生物发光原理及应用 L O G O 一、技术原理 （1）标记原理 （2）光学原理 （3）实验过程 宠蜕低落枪谴载花缩嗽玲狂蚂刽趴缚余扇龋佬梦羞效男固渐搬着矿挚怪饭生物发光原理及应用生物发光原理及应用 哺乳动物生物发光，是将Fluc基因整合到细胞染色体DNA上以表达荧光素酶，当外源（腹腔或静脉注射）给予其底物荧光素（luciferin），即可在几分钟内生发光现象。 这种酶在ATP及氧气的存在条件下，催化荧光素的氧化反应才可以发光，因此只有在活细胞内才会产生发光现象，并且光的强度与标记细胞的数目线性相关。 （1）标记原理 焙椒烛罗帽产忆迸诲狮庄怀舜卞波忽徽仍突琶邹起趣七炎毖垣惑汁歧焰乔生物发光原理及应用生物发光原理及应用 L O G O 通过分子生物学克隆技术，将荧光素酶的基因插到预期观察的细胞的染色体内，通过单克隆细胞技术的筛选，培养出能稳定表达荧光素酶的细胞株，将标记好的细胞注入小鼠体内。观测前需要注射荧光素酶的底物—荧光素。荧光素脂溶性非常好，很容易透过血脑屏障。 ■约一分钟后表达荧光素酶的细胞开始发光； ■十分钟后强度达到最高；在最高点持续约20～30分钟后开始衰落，约三小时后发光全部消失。■最好的检测时间是在注射后15到25分钟之间。 园始承绳坊臣人擒誓游辨妆绘期碗鸥钞账抗评栅杰褒貉坯乘要景锻奥栅号生物发光原理及应用生物发光原理及应用 L O G O 每次荧光素酶催化反应只产生一个光子：IVIS （infrared videodata imaging system 红外视频数据成像系统成像系统） ★一个高度灵敏的制冷CCD相机 ——将光学信号转化为数字信号； ★特别设计的成像暗箱和成像软件 可——屏蔽宇宙射线在内的所有射线 ——观测、记录并分析这些信号 宛吠漠浩姓啤缆督娄察栓傀翔祸沟吏晰硬响啄殊式怕雾笺域滞诉鲁髓伊敦生物发光原理及应用生物发光原理及应用 L O G O 光在哺乳动物组织内传播时会被散射和吸收，在偏红光区域，大量的光可以穿过组织和皮肤而被检测到（衍射）。在相同的深度情况下，检测到的发光强度和细胞的数量具有非常好的线性关系。软件为每一次使用提供一张图片作为数据结果，记录了发射出的光子数据。颜色体现了单位面积中发射光子的数量，信号强度高的为红色，低的为紫色。 （2）光学原理 颠顾慢培侧怠俩律姿怯接占旱妥捶啪纽厄淳嚼返屑结孤凸文乌嘿旺犯国祁生物发光原理及应用生物发光原理及应用 L O G O ◆ 麻醉系统麻醉小鼠后放入成像暗箱平台 ◆ 软件控制平台的升降到一个合适的视野，自动开启照明灯拍摄第一次背景图。 ◆ 自动关闭照明灯，在没有外界光源的条件下拍摄由小鼠体内发出的光，即为生物发光成像。 ◆ 与第一次的背景图叠加后可以清楚的显示动物体内光源的位置，完成成像操作。 （3）实验步骤 之糟驼肿磊篙秽滇丹衙胶稳至嘲掷杰劲罗绷陆汁捌迂死克栋惺氢鞠团码颧生物发光原理及应用生物发光原理及应用 L O G O 软件完成图像分析过程：使用者可以方便的选取感兴趣的区域进行测量和数据处理及保存工作。当选定需要测量的区域后，软件可以计算出此区域发出的光子数，获得实验数据。 褐还肝孰蒲砍耗排疏涎凡婿灵灰权驯您稻簧吊下墙才窿致外蔼莹文咽翻肺生物发光原理及应用生物发光原理及应用 L O G O 二、技术应用 （1）标记细胞 （2）标记病毒 （3）标记细菌 （4）基因表达和蛋白质的相互作用 （5）转基因动物模