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核酸分离纯化与鉴定
核酸的分离纯化和鉴定;核酸包括DNA、RNA，在细胞中都与蛋白质结合而存在。
分离纯化核酸总的原则 :
1、保证一级结构的完整性，完整的一级结构是研究核酸
结构和功能的基础；
减少化学、物理、生物因素对核酸的降解：
避免过酸、过碱对磷酸二酯键的破坏；
避免机械剪切力以及高温煮沸；
抑制DNase或RNase的活性；
2、排除蛋白质、脂类、糖类等分子的污染。;真核DNA提取的主要步骤;外周血白细胞DNA的提取 （NaI法）;【试剂】;操作步骤 ;Water phase (DNA);小心弃去上清，再加37%异丙醇（或70%乙醇）1 ml(勿摇动)，离心14000rpm×12min.
小心弃异丙醇（或乙醇），于室温敞口放置直至可见的痕量液体挥发殆尽。
加50μl TE缓冲液溶解DNA, 以琼脂糖凝胶电泳鉴定或-20℃保存。;标本必须新鲜，提取前细胞应保持完整。所用Ep管、滴头等用品及ddH2O、试剂等应高压灭菌，操作尽量??4℃以下进行。
混匀试剂、吸取上清液等操作时应避免动作剧烈。
弃去异丙醇时动作应轻，切忌甩干，以免DNA丟失。
0.54-1倍的异丙醇可选择性沉淀DNA和大分子rRNA和mRNA，但对5SRNA、tRNA及多糖不产生沉淀。一般不需在低温条件下长时间放置。其缺点是易使盐类与DNA共沉淀；在DNA沉淀中的异丙醇难以挥发除去，所以常规需要70%乙醇漂洗DNA沉淀物。
室温下放置16h或65℃放置1h, 可加快基因组DNA沉淀的溶解。;核酸的鉴定与分析 ;DNA的鉴定;操作;核酸凝胶电泳 ;DNA的琼脂糖凝胶电泳 ;【试剂与材料】;【操作步骤】;【注意事项】;思考题
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