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遗传工程与转基因技术 0801
DNA重组技术的应用 ;常用的表达系统大肠杆菌 E.c;细菌细胞优越性 操作方便细菌繁;酵母细胞 优越性为十分简单的真;昆虫细胞 利用昆虫病毒，杆状病;哺乳动物细胞 生产哺乳动物蛋白;启动子 可使克隆的外源基因高水;3. 这种启动子应是诱导型的，;在启动子tac的一10和一35;调节基因R 编码阻遏物，可调;克隆载体 克隆质粒载体基因克隆;pGEM-T和pGEM-T E;表达质粒载体原核表达质粒载通常;lac启动子 较早使;PL启动子 来自λ噬菌;pET表达系统表达外原蛋白必须;pcDNA3.1/His表达载;表达载体起始密码子下游有一段编;组织纤溶酶原激活物克隆表达tP;DNA限制性内切酶消化 DNA;在需进行双酶切反应时，可采用以;酶解反应 主要应用于质粒;操作方法 按下列顺序加入;注意问题1. 双蒸水为可变体积;UNIQ-10质粒提取试剂盒提;操作步骤1． 将过夜培养的1;6．将步骤5中上清转移到套放于;DNA体外连接 利??DNA连接;2.带有非互补的粘端 用两种不;成功的连接反应需纯净的目的DN;粘性末端连接 碱性磷酸;载体与目的DNA片段的连接1.;平粘端连接 1.制备目;重组DNA的转化 转化是将外;试剂及仪器 1. LB液;受体菌的培养 1. 将甘;感受态细胞的制备1.将培养的菌;转化加外源DNA 100～50;重组DNA转化受体细胞后，须在;插入失活法筛选 原理 该法;α互补筛选 适用于含有β;试剂X-gal (20mg/m;脂质体介导的转染脂质体 一种人;本方法适用于将DNA或RNA转;脂质体载体法 阳离子型的脂质;DNA脂质复合物转染法 将外源;操作方法1. 在转染之前，将细;6. 将上述液体小心吸取3 m;注意问题目前许多分子生物学公司;TA克隆系统由Invitrog;PCR扩增 PCR;连接 ddH2O ;转化⑴ 在冰上融化0.5mol;PCR产物的鉴别 ;转基因动物 把外源基因导入动物;雌性鼠（卵） 雄性鼠（精子）→;受精卵 2个前核，Pronu;转基因家兔，猪，羊 转入的基因
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