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β-环糊精增敏亚甲基蓝测定抗坏血酸 刘奇1( 魏静娟 杨红瑞 王爱军 （河南师范大学 化学与环境科学学院，河南 新乡 453007） 摘要：在酸性条件下，抗坏血酸(AA)与亚甲基蓝（MB）形成不发荧光的离子缔合物。在pH=4.0时，加入适量β-环糊精β-CD），MB由于和β-CD形成包合物而使其荧光强度大大增强，导致荧光猝灭值ΔF随抗坏血酸的加入上升为原来的近3倍，从而提出了一种增敏亚甲蓝荧光猝灭法测定抗坏血酸的新方法。该体系最大激发波长为λex =nm，最大发射波长为 λem =nm，线性范围为～g /L，检出限mg/L，相对标准偏差为β-环糊精；O657.32 文献标识码：A Keywords：β-Cyclodextrin；Methylene blue；；Fluorescence quenching method坏血酸（Ascorbic acid，AA），即Vc，是一种存在于水果和植物中维持生物体正常生命过程所必须的维生素之一，缺乏它将引起机体抵抗能力严重下降并导致坏血病。由于AA对于人体生理机能的重大意义，它的分析应用引起了广泛关注。AA的分析方法主要有分光光度法[1,2]，电化学法[3,4]，荧光分析法[5-7]，色谱法[8]，毛细管电泳法[9]等。 亚甲基蓝（Methylene blue，MB）具有较强的荧光，抗坏血酸本身无荧光，当二者结合形成离子缔合物时，将导致MB荧光显著猝灭。MB[7]或者环糊精衍生物直接荧光法测定抗坏血酸[6,10]已有文献报道，但是利用β-环糊精通过主-客体形成包合物而作为增敏剂的方法并未见报道。本文在β-环糊精与MB形成包合物的基础上，使MB荧光强度大大增强，加入AA后其ΔF，从而提出了一种测定抗坏血酸的新方法。该方法已直接应用于维C片剂，针剂及果汁中AA含量的测定，结果令人满意。 实验部分 1.1 仪器与试剂 FP-6500型荧光光谱仪﹙日本JASCO公司﹚；UV-1700紫外可见分光光度计﹙SHIMADZU﹚；PFS-80型酸度计（上海大中分析仪器厂）；BS-110S 型电子天平（北京赛多利斯天平有限公司）。 β-环糊精（国药集团化学试剂有限公司，使用前经沸水重合晶两次，化学纯）：1.0×10-3mol/ L；（上海试剂三厂）1.0×10-4mol/L；Clark-Lubs缓冲溶液体系：pH-5（酸度计校正）；其它试剂均为分析纯；实验用水为二次去离子水。 1.实验方法在比色管中依次加入1 ×10- 4 mol/ L溶液mL，pH=4缓冲溶液1.5mL， β-CD3 mL和适量的抗坏血酸标准溶液，用蒸馏水稀释至mL，摇匀，放置后，以nm为激发波长测定溶液的荧光强度F，以对应试剂空白的荧光强度为F0，计算△F=F0－F2 结果与讨论 2.1光谱光谱β-CD和水溶液中的荧光光谱图和紫外-可见吸收光谱图。由图1可看出，加入β-CD后，MB的荧光强度大大提高（曲线1a1和1b1）；在抗坏血酸与被β-CD包合的亚甲基蓝形成离子缔合物导致荧光猝灭后，体系最大发射波长发生微弱蓝移（曲线1a3）；不管是荧光猝灭值ΔF还是吸光度下降值ΔA均为β-CD/MB﹣β-CD/MB+AA远远大于 MB﹣MB/AA；这些证明β-CD可以作为增敏MB的敏化剂。 图1 荧光发射光谱 Fig. 1 Emission spectra 图1 紫外-可见吸收光谱图 Fig. 1(b) Absorption spectra pH=4.0 CMB:3×10-6mol/L；Cβ-CD:3×10-3 mol/L；C Ascorbic acid:20mg/LΔF）的变化情况。结果表明：随pH值的增加，荧光强度逐渐增大，在pH=4.0时，ΔF有最大值，其后又随pH增大而减小，本实验选择加入pH=4.0的Clark-Lubs缓冲溶液β-环糊精的最佳加入量β-CD的加入量，结果发现随着β-CD浓度的增大，体系荧光强度依次增大，当β-CD加入量≥2.5mL时，△F几乎保持不变，故选择β-环糊精加入量为3ml。 2.2.3亚甲基蓝用量选择 按照实验方法，改变亚甲基蓝的加入量，结果发现随着MB用量的增加，其ΔF值逐渐增大，当亚甲基蓝的用量在0.25-0.3ml时，体系的ΔF值最大且基本稳定，随后随亚甲基蓝加入量的增大ΔF值又开始减小，故选亚甲基蓝用量为0.3ml。 2.2.4 温度的影响 按照实验方法，分别测定了在0℃，10℃,20℃,30℃和40℃条件下不同温度对荧光强度F的影响，如图2所示，随着温度的增加，β-CD/MB包合物的荧光强度F0逐渐减小；β-CD/MB+AA的荧光强度F逐渐增大；导致ΔF随温度的增加而减小，即在0℃时ΔF有最大值。原因是随着T的增大，β-CD/MB包合物稳定性逐渐降低，所以MB失去了β-CD疏水性空腔