基因诊断Genediagnosis中国医科大学医学遗传学教研室李福才.PPT

第二节 基因治疗（Gene theraphy?） 基因治疗（gene theraphy?）：是指将外源正常基因导入靶细胞，以纠正或补偿因基因缺陷和异常引起的疾病以达到治疗的目的。 为达到这一目的，实施相应的策略。 1、直接疗法：纠正突变基因 也就是在原位修复缺陷的基因，以达到治疗目的。这种方法上较理想的基因治疗策略，由于存在某些问题，目前正在努力之中。（未实现） 2、间接疗法：以正常基因替代致病基因。 导入外源正常基因，代替有缺陷的基因。对靶细胞而言，没有去除或修复有缺陷的基因。 二者均是用DNA重组技术设法修复患者细胞中有缺陷的基因，使细胞恢复正常功能而达到治疗遗传病的目的。 途 径 就基因转移的受体细胞不同，基因　　　　 　　　　治疗有两种途径： 　　　1、生殖细胞基因治疗 2、体细胞基因治疗 1、生殖细胞基因治疗 理论上将正常细胞基因转移到患者的生殖细胞（精细胞，卵细胞早期胚胎）使其发育成正常个体。这是理想的治疗方法，从根本上治疗遗传病，使其有害基因不能在人群中播散。 但还存在某些问题： 　1）靶细胞的遗传修饰至今尚无实质性进展； 　2）基因转移效率不高，只能用显微注射方法； 　3）只适用于排卵周期短而次数多的动物，很难适用于人类。 　（但目前辅助生殖技术的发展较为有效的解决了获取卵细胞的办法。一次可获取少者3-5个，多者十几个。） 2．体细胞基因治疗（somatic cell gene therapy） 是指将正常基因转移到体细胞，使之表达基因产物，以达到治疗的目的。但有害基因能遗传给后代。 措 施： （1）正常基因转移至体外培养的体细胞，有效表达后，再回输到体内。 （2）正常基因导入靶细胞，定位整合到染色体上，准确的替换异常基因，是理想的措施。 （3）随机整合，非特定座位，只要有效的表达即可达到治疗的目的。 （4）体细胞基因理论不必矫正所有的体细胞。 存在的问题： （1）对特定座位基因转移，目前还存在较大困难； （2）随机插入可能引起后代的基因突变。 基因治疗的方法（The methods of gene therapy） 实施基因治疗的第一个关键性步骤是 基因转移 一、Gene转移方法 1、正常基因的分离与克隆 基因治疗首先获得目的基因通常从基因组中 分离 经克隆 ↓ 定 位 ↓ 表 达 ↓ 评价表达情况 2、外源基因的转移 通过不同方法，将目的基因转移至受体细胞。 （1）化学法 磷酸钙沉淀法： 目的基因与磷酸钙等物质混合，形成沉淀的DNA 微细颗粒，易通过细胞膜进入细胞内，并整合到受 体细胞基因组中，在适当条件下得以表达。方法简 单，但转化效率低。 Ca2(PO4)2+DNA → 混合微细颗粒 （ Ca离子浓度 125 mmol， DNA 离子浓度 5～0ug/ml。 PH 7.0） ↓ 沉淀反应20~30min ↓ 细胞在沉淀物中暴露 5~24h (2)物理方法 1、电穿孔法（electroporotion） 将细胞至于高压脉冲电场中，通过电压 使细胞产生可逆性的穿孔。周围基质中 的DNA可渗进细胞，进而表达。 瞬间 细胞 细胞膜核摸通透性增加 高压脉冲 DNA渗入细胞 2、显微注射法（microinjection ） 利用显微操作把目的基因直接注入靶细胞或 细胞核中。 例：转基因动物的制备