抗体的制备——初次免疫.ppt

抗体的制备——初次免疫 * 异种抗原: 诱导产生抗体，通过多次免疫，使抗体量增加和特异性增强。 SRBC mouse 1. 原理: * 抗原 动物 血清(含抗体) 皮下注射，3次 * 2. 方法: 脱纤维绵羊红细胞（SRBC） 加入3ml 生理盐水，混匀 2000rpm, 离心，5min 弃上清（小心吸尽） 制备绵羊红细胞溶液20%、25%、30%、40% 取0.1ml 皮下注射免疫小鼠 加入3ml 生理盐水，混匀 2000rpm, 离心，5min 弃上清 洗第一次 洗第二次 多克隆抗体（溶血素）单位滴定 原 理 略述补体经典激活途径 ＋ ＋ ＋ ＋ 不溶血 溶血 免疫血 清 补体 SRBC 材 料 2%绵羊红细胞 补体 豚鼠血清，1:30稀释 溶血素: 小鼠免疫血清 其他 略 1 2 3 4 5 NS 0.9 0.5 0.5 0.5 0.5 小鼠血清 0.1 0.5 0.5 0.5 0.5 稀释度 1:10 1:20 1:40 1:80 1:160 方 法 1.制备和稀释溶血素： 1）摘眼球处死小鼠，使小鼠血流入一EP管中。 2）室温凝固15-30分钟 3）5000rpm离心5分钟 4) 将上清移入一只新EP管，然后进行稀释 方法如下： 3.溶血素滴定加样（ml）（试管中） 试管号 不同稀释度溶血素 补体 生理盐水（NS） 2%SRBC 终稀释度 结果 1 0.2（1:10） 0.2 0.4 0.2 1:50 2 0.2 (1:20) 0.2 0.4 0.2 1:100 3 0.2（1:40） 0.2 0.4 0.2 1:200 4 0.2（1:80） 0.2 0.4 0.2 1:400 5 0.2（1:160） 0.2 0.4 0.2 1:800 6（补体对照） — 0.2 0.6 0.2 7（完全溶血对照） 双蒸水0.8 0.2 完全溶血 4.充分混匀，37℃ 30分钟。 结果：发生完全溶血的最高稀释度的溶血素活性为1个单位。