第5章 RNA剪接与加工.pptVIP

第五节 RNA剪接和加工;细胞核内的RNA平均长度比mRNA大得多，且长短差异大，称为核不均一RNA（heterologous nuclear RNA，hnRNA）。 hnRNA通常与蛋白质形成核蛋白颗粒，称为hnRNP。其中蛋白组分很多。;翻译;三类剪接系统: 高等真核生物中，外显子-内含子边界、位于内含子内的短的保守序列，由一复杂的核蛋白组成的剪接器复合体对其识别，并切除内含子。 有两组不同的内含子可发生自我剪接。 酵母核前体tRNA内含子的切除。 除核前体tRNA外，RNA的剪接都通过酯基转移（transesterification）反应切除。;（一）核RNA剪接的模式 内含子两端没有长的同源或互补序列，但有极短的保守的共有序列，左端（上游）为GT，右端（下游）为AG。这一现象称为GT-AG规则。在RNA中则为GU-AG。;原则上5 ′可以和任何3 ′ 位点进行剪接。;exon-trapping;内含子切除存在优先途径;剪接的第一步，是内含子5’ 端与上游外显子之间断裂； 5’端与内含子中靠近3’端的一A 残基2’-OH 形成一索套形中间产物; A 所在位点称为分支位点（branch site）; 第二步，在3’位点切割，释放出内含子，连接两个外显子。;两步反应都通过酯基转移（transesterification）进行;（二）剪接体（spliceosome）;snRNP与其它蛋白形成剪接体（spliceosome）。 参与剪接的snRNA都很保守，参与剪接的snRNA为U1, U2, U4, U5, U6。每个snRNP含一个snRNA和多个蛋白，其结构核心都有一组8个蛋白。 除U6 外，都含有保守序列PuAU3-6GPu。 snRNA的功能：参与核蛋白复合体的结构构建；通过与靶位点RNA或在snRNA之间的碱基配对来执行剪接功能。;U1 snRNA可直接与内含子5位点配对，这是为剪接所必须的。;剪接体的组装和剪接过程;5’ of Intron 剪切与lariat 的形成同步;U6与U4、U2通过碱基配对相互作用;二、 自我剪接的RNA;一类内含子（Group I ）;GNP的3’-OH攻击内含子5’端，形成G-内含子，和外显子部分； 分离的外显子3’-OH攻击下一个外显子的5’端； 释放的内含子3’-OH攻击自身5’端15碱基处。;租扑羊滨涵漠律俩或塔族茨桐港漆为篡睬铸狰发药谨辊郎昧逢荡刹嚏扇截第5章 RNA剪接和加工第5章 RNA剪接和加工;线型L19 RNA可催化寡聚胞苷酸（C5）延长;具有9个配对区（双螺旋区），其中P4、P7比较保守； P3、P4、P6、P7形成内含子的“核心”，是可进行具催化反应的最小区域； P1包括一段外显子，称为IGS（internal guide sequence）。;II 类内含子的domain5和domain6的结构，类似于和核RNA内含子剪接体中U6-U2及U2-内含子配对形成的结构。;三类内含子剪接模式的比较;三、酵母tRNA的剪接;tRNA 的剪接与成熟 （真核生物） ;3’ACC;四、 RNA的末端修饰;2、甲基化;mRNA 3末端的产生;Pol II无特定终止位点，3’-OH末端通过在特定位点切割后加上poly(A)来形成。 末端的AAUAAA序列作为切割和添加poly(A)的位点的信号。;产生正确的末端结构需要核酸内切酶（由CFI和CFII组成）切割RNA； 特异组分（CPSF）识别AAUAAA序列； 激发因子CstF，结合在切割位点下游一富含G-U的序列。 poly(A)聚合酶（PAP）合成poly(A)尾部； ;酵母中rRNA的一般加工过程;细菌rRNA基因中还常包含有1～2个tRNA基因;脊椎动物rRNA有大量的甲基化位点，位于保守位置； 大多数snoRNA含有与18S、28S RNA甲基化位点互补的序列； 碱基配对形成的双螺旋结构可为甲基化酶所识别。;酵母rRNA 中假尿苷的合成;五、 RNA 编辑;载脂蛋白B（apo-lipoprotein B, apoB）基因在动物肝脏和小肠中的表达。 C U转变通过脱氨反应进行??由脱氨酶催化。;细胞色素氧化酶II蛋白的序列与其基因相比，发生了移码（frameshift）。移码是通过在移码位点附近插入4个U形成。;T. brucei 的coxIII gene 在转录后大规模的RNA 编辑: 插入大量碱基U，也删除了部分碱基U。;利什曼原虫（Leishmania）的细胞色素 b 基因表达时的RNA编辑;U-OH