树鼩中APP基因特征描述及可变剪接体的分型鉴定.PDF

２０１７年４ 月 中国实验动物学报 Ａｐｒｉｌ２０１７ 第２５卷　 第２期 ＡＣＴＡ ＬＡＢＯＲＡＴＯＲＩＵＭ ＡＮＩＭＡＬＩＳ ＳＣＩＥＮＴＩＡ ＳＩＮＩＣＡ Ｖｏｌ． ２５　 Ｎｏ． ２ 研究报告 树鼩中ＡＰＰ基因特征描述及可变剪接体的分型鉴定 罕园园，孙晓梅，匡德宣，陆彩霞，陈玲霞，仝品芬，王文广，李娜，代解杰∗ （中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所树鼩种质资源中心，云南省重大传染病疫苗研发重点实验室， 中国医学科学院医学生物学研究所实验树鼩标准化与应用研究省创新团队，昆明　 ６５０１１８） 　 　 【摘要】　 目的　 区分并鉴定树鼩中ＡＰＰ基因ｍＲＮＡ 的多种可变剪接体，对ＡＰＰ基因特征进行描述，并确定 其在各组织中的表达分布。 方法　 参考已知人的和树鼩基因组预测的ＡＰＰ基因序列，设计树鼩ＡＰＰ基因ｍＲＮＡ 剪切体外显子的共同特异性引物。 分别从树鼩不同组织中提取总ＲＮＡ，反转录为ｃＤＮＡ，利用高保真酶扩增目的剪 切体ＤＮＡ。 根据ＰＣＲ扩增产物电泳条带的有无和大小初步判断剪接体的型别，最后将ＰＣＲ产物胶回收进行测序 鉴定，对获得的基因进行特征描述，并结合定量ＰＣＲ的结果确定了各剪接体在不同组织中分布情况。 结果　 结果 表明树鼩ＡＰＰ剪接体的全长为３５１４ ｂｐ，有一个１０９ ｂｐ 的５’⁃ＵＴＲ，１０９２ｂｐ 的３’⁃ＵＴＰ。 ＡＰＰ基因在调查的９个物种 中高度同源保守，显示树鼩与灵长类存在一个较近的亲缘关系。 通过三维建模获得了树鼩和人的ＡＰＰ基因共同拥 有的４个结构域。 同时确认这４种通过外显子跳跃产生的ＡＰＰ可变剪接体在不同组织中的分布和表达。 ４种检测 到的剪接体ＡＰＰ７７０，ＡＰＰ６９５，ＡＰＰ７５１，ＡＰＰ６７７均表达于肺、肾和肠，表达量最高的是肺、肌肉和睾丸。 结论　 对树鼩 ＡＰＰ基因可变剪接体的表达研究，有助于推动树鼩作为阿尔茨海默病模型深入研究疾病的发生机制和药物研发。 【关键词】　 树鼩；ＡＰＰ基因；可变剪接体；阿尔茨海默病模型 【中图分类号】 Ｑ９５⁃３３　 　 【文献标识码】 Ａ　 　 【文章编号】 １００５⁃４８４７（２０１７）０２⁃０１３２⁃０７ Ｄｏｉ：１０３９６９／ ｊ．ｉｓｓｎ．１００５－４８４７２０１７０２００４ Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｒｅｅ ｓｈｒｅｗ ＡＰＰ ｇｅｎｅ ａｎｄ ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｉｔｓ ａｌｔｅｒｎａｔｉｖｅｌｙ ｓｐｌｉｃｅｄ ｖａｒｉａｎｔｓ ＨＡＮ Ｙｕａｎ⁃ｙｕａｎ，ＳＵＮ Ｘｉａｏ⁃ｍｅｉ，ＫＵＡＮＧ Ｄｅ⁃ｘｕａｎ，ＬＵ Ｃａｉ⁃ｘｉａ，ＣＨＥＮ Ｌｉｎｇ⁃ｘｉａ ＴＯＮＧ Ｐｉｎ⁃ｆｅｎ，ＷＡＮＧＷｅｎ⁃ｇｕａｎｇ，ＬＩ Ｎａ，ＤＡＩＪｉｅ⁃ｊｉｅ∗ （Ｃｅｎｔｅｒ ｏｆ Ｔｒｅｅ Ｓｈｒｅｗ Ｇｅｒｍｐｌａｓｍ Ｒｅｓｏｕｒｃｅｓ，Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｃｈｉｎｅｓｅ Ａｃａｄｅｍｙ ｏｆ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ ａｎｄ Ｐｅｋｉｎｇ Ｕｎｉｏｎ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｃｏｌｌｅｇｅ． Ｙｕｎｎａｎ Ｋｅｙ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｏｆ Ｖａｃｃｉｎｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ａｎｄ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｏｎ Ｓｅｖｅｒｅ