核酸提取纯化对下游试验的必要性.pdfVIP

核酸提取纯化对下游 PCR 实验的重要性 很多实验室在进行 PCR 实验的时候，都并不进行样本提取的步 骤，而直接简单研磨或者煮沸后即进行 PCR 实验。对于 DNA 含量丰 富、无细胞壁、或细胞机构较为松散的样本，不进行提取，直接简单 处理后进行 PCR 确实可以得到扩增产物。但对于大多数生物样本来 说，不进行提取纯化的步骤， 直接进行 PCR，都会严重影响核酸的得 率和扩增的效果。 比较进行提取和不进行提取的植物组织基因组扩增结果，如下 图。左侧为未进行 DNA 提取所得产物扩增图，右图为进行 DNA 提 取后扩增图。 比较进行提取和不进行提取的动物组织金银组扩增结果，如下 图。 1 道为标准品核酸扩增结果， 2 道为 Marker ，3~6 道为为进行核 酸提取，研磨后煮沸所得产物扩增结果， 7 道为离心柱法提取后产物 扩增结果， 8 道为磁珠法提取后所得产物扩增结果。 对于荧光定量 PCR 检测的实验， 核酸提取纯化的步骤更为重要， 因为要定量检测，样本所含 DNA 的释放程度至关重要。未进行核酸 提取，直接进行 PCR，对于微量样本， 经常出现假阴性结果，即使检 测结果为阳性，定量准确度也有很大偏差，有时，定量结果可以相差 一到两个数量级。