氨茶碱的血药浓度测定实验报告.doc

氨茶碱的血药浓度测定及药动学参数计算 一、【目的】掌握血清中氨茶碱血药浓度的紫外测定法，掌握血清中茶碱提取法，验证氨茶碱的动力学模型，掌握二房室动力学模型的参数计算方法。用有机溶剂将血清中的氨茶碱提出，用紫外测定法根据标准曲线测出氨茶碱浓度，用残差法运用计算机进行数据处理、曲线描绘及参数计算，从而验证氨茶碱动力学模型，使大家对药动学研究有一初步的了解。 二、【原理】氨茶碱为临床常用平喘药，由茶碱与乙二胺缩合而成，在体液中可分离出茶碱。在酸性条件下，可用有机溶剂从血清中提出茶碱，并同时沉淀血清蛋白，再用碱液把茶碱从有机溶剂中提出（见图1）。测量λ274和λ298处的吸光度（A274为茶碱和本底，即溶剂、血清的吸光度，A298为本底的吸光度）。茶碱的吸收度为△A = A274 (A298，使用UV1601双波长分光光度计测定（见图2）。 图1．茶碱的抽提过程 图2 氨茶碱经静脉进入血液，随血液循环进行组织分布，达到平衡后转入消除相。时量曲线呈二房室动力学模型，公式为C = Ae-αt +Be-βt，曲线由分布相Ca = Ae-αt和消除相Cb =Be-βt两部分组成，其对数表达式分别为log Ca = (-αlog e) t + log A 和log Cb = (-βlog e) t + log B（见图3），在对数坐标上由于分布相较早趋近于零，故可先在时量曲线终末段直线回归法求出消除相对数表达式log Cb = (-βlog e) t + log B，然后用差数法求出Ca = C - Cb，再次运用直线回归法求出分布相对数表达式log Ca = (-αlog e) t + log A，最终得到所有的参数A、α、B和β，从而得到时量曲线C = Ae-αt +Be-βt 。 图3．二房室模型的时量曲线 三、器材：玻璃试管、离心管、注射器、吸管、离心机、微量进样器、UV1601双波长分光光度计。药品与试剂：氨茶碱标准液，0.1 N HCl，0.1 N NaOH，异丙醇：氯仿抽提液(5：95)。动物：家兔，体重2.5～3 kg。 四、【方法步骤】 动物实验：给药、不同时段取血，测定一系列血药光密度（ΔAt） 取健康家兔一只，用二甲苯涂擦兔耳以扩张血管，静脉注射肝素750IU/kg抗凝，取空白血约0.5ml。经4min后一耳缘静脉注射氨茶碱(2分钟内注射完)，另一耳缘静脉在不同时段取血，取血时间（x）如表2。2500转/分离心5分钟分离血清，各管均取血清0. 25 ml于试管中，加0.1 N盐酸溶液0.1 ml、抽提液2.5 ml，振摇混合，2500转/分离心10分钟，吸取氯仿液(下层)2 ml置另一试管中，加入0.1 N NaOH溶液2ml，振摇混匀，2500转/分离心10分钟，吸取碱液(上层)，以空白血为参比，测定一系列ΔAt，结果填入表2的第一和第二列。 操作流程如图4： 图4．ΔAt操作流程 2.标准管加样 取试管5支，依次加入0.1mg/ml的茶碱标准液20、60、80和100 (l，然后各管加入0.1 N NaOH溶液使总容积为4 ml，则浓度依次为0.5、l.0、l.5、2.0、2.5 (g/ml，测定各管△A，填入表1。 五、【数据处理】 （1） 利用Excel求药物光密度（Y）与浓度（X）之间的回归关系Y = A’ + B’X 表１．标准管加样 标 准 管 号 1 2 3 4 5 茶碱标准液 (ml) 0.02 0.04 0.06 0.08 0.10 0.1N NaOH 溶液 （ml） 3.98 3.96 3.94 3.92 3.9 茶碱浓度X（(g/ml） 0.5 1.0 1.5 2.0 2.5 光密度Y （△A） 0.039 0.077 0.116 0.160 0.198 回归方程 Y=0.0802X-0.0023 Excel模板已经做好，仅需要在标准直线工作表中的第二列填入相应的△A值，Excel便自动绘出茶碱光密度——浓度回归直线（见图5），并标明其表达式Y = A’ + B’X，给出相应的统计参数截距A’=-0.002、斜率B’=0.080和相关系数R’=1.000?。 图5 （2）计算不同时段血药浓度，求时量曲线C = Ae-αt +Be-βt及药动参数 不同时间点x (min)及其相应血药光密度（ΔAt）已经填入了表2的第一和第二列，在Excel模板“血药浓度计算”工作表中已预先拷入了表2，则相应血药浓度Ct (μg/ml)和血药浓度对数值 y自动在第三和第四列求出血药浓度和二房室模型的药动参数，有以下几步： 表2．不同时段血药光密度（ΔAt）记录 x (min) ΔAt Ct ((g/ml) y (log C) Ct =( ΔAt - A ) / B*4