镉对小鼠精子蛋白酪氨酸磷酸化修饰的影响及EGTA的-应用生态学报.PDFVIP

应 用 生 态 学 报　 ２０１６年１２月　 第２７卷　 第 １２期　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 ｈｔｔｐ：／ ／ ｗｗｗ．ｃｊａｅ．ｎｅｔ － － ＣｈｉｎｅｓｅＪｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ａｐｐｌｉｅｄ Ｅｃｏｌｏｇｙ，Ｄｅｃ． ２０１６，２７（１２）：４０４５ ４０５１　 　 　 　 　 　 　 　 ＤＯＩ：１０．１３２８７／ ｊ．１００１ ９３３２．２０１６１２．００１ 镉对小鼠精子蛋白酪氨酸磷酸化修饰的影响 及ＥＧＴＡ 的保护作用 王立蕊　 杨强震　 李玉华　 李思思　 张宇坤　 付杰丽　 甄林青　 李新红∗ （上海交通大学农业与生物学院上海市兽医生物技术重点实验室，上海 ２００２４０） 摘　 要　 采用体外培养的方法，利用精子活力分析软件（ＣＡＳＡ）、蛋白免疫印迹（ＷＢ）及免疫 荧光技术，探讨镉（Ｃｄ）对小鼠精子活力参数、蛋白酪氨酸磷酸化修饰的影响，并对小鼠精子 酪氨酸磷酸化蛋白进行细胞亚组分定位． 结果表明：Ｃｄ 对小鼠精子活力具有明显抑制作用， －１ 且随着Ｃｄ 浓度的增加抑制作用增强，当Ｃｄ 浓度达到１．０ μｍｏｌ ·Ｌ 时，小鼠精子活力（ＭＯＴ） －１ 显著低于对照组；同时，Ｃｄ促进小鼠精子蛋白酪氨酸磷酸化，当浓度≥１．０ μｍｏｌ ·Ｌ 时，尤其 分子量约为５５ ｋＤａ 的蛋白酪氨酸磷酸化程度显著增强，且免疫荧光结果显示主要集中在小 －１ －１ 鼠精子中段；当用３０ μｍｏｌ ·Ｌ 乙二醇二乙醚二胺四乙酸（ＥＧＴＡ）和１０ μｍｏｌ ·Ｌ Ｃｄ 同时培 养时，５５ ｋＤａ 蛋白并未发生明显的酪氨酸磷酸化修饰，而且小鼠精子活力变化不显著． 表明 Ｃｄ 可能是通过诱导中段５５ ｋＤａ 蛋白发生酪氨酸磷酸化修饰从而抑制精子活力，ＥＧＴＡ 能螯 合Ｃｄ 离子并有效防止其毒性作用． 研究证实，Ｃｄ诱导精子特异性蛋白酪氨酸磷酸化增强，进 而抑制精子活力． ＥＧＴＡ 可以用于体外控制Ｃｄ进入细胞的阻断剂，为Ｃｄ 繁殖毒性分子机制 的研究提供了研究手段． 关键词　 重金属；信号通路；繁殖毒性； 阻断剂 Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｃａｄｍｉｕｍ ｏｎ ｐｒｏｔｅｉｎ ｔｙｒｏｓｉｎｅ ｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｍｏｕｓｅ ｓｐｅｒｍａｔｏｚｏａ ａｎｄ ｔｈｅ ｐｒｏ⁃ ｔｅｃｔｉｖｅ ｒｏｌｅ ｏｆ ＥＧＴＡ． ＷＡＮＧＬｉ⁃ｒｕｉ，ＹＡＮＧ Ｑｉａｎｇ⁃ｚｈｅｎ，ＬＩＹｕ⁃ｈｕａ，ＬＩ Ｓｉ⁃ｓｉ，ＺＨＡＮＧＹｕ⁃ｋｕｎ， ＦＵＪｉｅ⁃ｌｉ，ＺＨＥＮ Ｌｉｎ⁃ｑｉｎｇ，ＬＩ Ｘｉｎ⁃ｈｏｎｇ （Ｓｈａｎｇｈａｉ Ｋｅｙ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｏｆ Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ，Ｓｃｈｏｏｌ ｏｆ Ａｇｒｉ⁃ ｃｕｌｔｕｒｅ ａｎｄ Ｂｉｏｌｏｇｙ，ＳｈａｎｇｈａｉＪｉａｏｔｏｎｇ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｓｈａｎｇｈａｉ２００２４０，Ｃｈｉｎａ）． Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｉｎ ｔｈｉｓｓｔｕｄｙ，ｗｅ ｅｘｐｌｏｒｅｄｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔｓｏｆ ｃａｄｍｉｕｍ （Ｃｄ）ｏｎ ｍｏｕｓｅ ｓｐｅｒｍ