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HPLC仪及其使用P245;HPLC仪器结构示意图; 首先高压泵将贮液器中流动相溶剂经过进样器送入色谱柱，然后从控制器的出口流出。当注入欲分离的样品时，流经进样器贮液器的流动相将样品同时带入色谱柱进行分离，然后依先后顺序进入检测器，记录仪将检测器送出的信号记录下来，由此得到液相色谱图。;一.流程;（一）输液系统 1.溶剂贮存器 溶剂贮存器一般由玻璃、不锈钢或氟塑料制成，容量为1到2 L，用来贮存足够数量、符合要求的流动相。 ; 主要部件之一，压力：150～350×105 Pa。 为了获得高柱效而使用粒度很小的固定相（10μm），液体的流动相高速通过时，将产生很高的压力，因此高压、高速是高效液相色谱的特点之一。 应具有压力平稳、脉冲小、流量稳定可调、耐腐蚀等特性;梯度淋洗装置;泵的操作注意问题;故障排除;流动相的脱气和贮存;梯度洗脱注意问题; (二）色谱柱系统进样器+色谱柱(1) 进样装置; 开始分析;(2)色谱柱; 不锈钢管制成，内壁高度光洁 常规分析型 Φ2-5mm 长 10-30cm 窄径柱 Φ1-2mm 长 10-20cm 毛细管柱 Φ0.2-0.5mm 长10-20cm 制备型 Φ20-40mm 长10-30cm 固定相采用匀浆法高压装柱 1． 柱效评价 2005版《中国药典》规定，需进行“色谱条件与系统实用性实验”给出分析状态下色谱柱（应达到的）最小n理 R 主要依据大连依利特公司的评价条件 硅胶柱： 样品：四氯化碳(K=0)苯，萘，联苯，菲（用正已烷配制） 流动相：正已烷 反向色谱柱（ODS柱等）： 样品：苯磺酸钠或尿嘧啶（K=0），苯，萘，联苯，菲 流动相：甲醇-水 （83：17） 乙腈-水 （60：40） 正相色谱柱（氰基与氨基柱） 样品：四氯乙烯（K=0） 邻苯二甲酸二甲酯 邻苯二甲酸二正丁酯及肉桂醇 （偶氮带，氧化偶氮苯及硝基苯） 流动相：正庚烷 见书：P253表4-15 ;柱效指标J;2、色谱柱的使用和维护 良好的色谱实验习惯： 拿到一根新色谱柱时，先测柱效 保留在新色谱柱上测得的色谱图，并记录条件 定期检测柱效 定期检测仪器的谱带展宽 色谱柱的使用及操作： 流动相的转换 流速(压力)的变化幅度 温度的变化幅度 专用色谱柱∶样品及溶剂的要求 ; 色谱柱的保养（一） 样品方面 除去微粒及杂质 了解样品在流动相中的溶解度 如样品的溶剂不是流动相，一定要用流动相试溶解度，防止其在流动相中析出 了解样品与色谱柱的基质/填料是否相互作用 色谱柱的保养（二） 流动相方面 除去微粒 纯度的要求 超纯水，梯度实验时水中有机杂质含量要低 缓冲液的pH值，在填料的允许范围内 缓冲液（盐）的浓度 溶剂：色谱纯，并与填料相匹配 溶剂中的杂质含量 流动相对样品的溶解度 有机溶剂或水的比例 ; 在线的保护装置 给色谱柱提供物理的保护 除去样品及流动相中的颗粒 给色谱柱提供化学的保护 防止分析柱被化学污染 装置 在线过滤器 预装保护柱 在线过滤器 In-Line Filter 防止颗粒在色谱柱头累积 优点：基本不影响柱效 在需要高柱效的分析时中常用（如：氨基酸分析） 保护柱 可避免化学污染。多数保护柱影响到整个色谱柱的柱效，特别是在用微柱时。 保护柱的种类： 1、预装保护柱 有各种填料的预装柱供选择，使用方便。填料容积较小，也引起柱效降低。 ;可换芯式保护柱;色谱柱的清洗;色谱柱的存放;色谱柱常见毛病;柱压过高;柱效低;重复性差、回收率低;色谱柱以外的因素（一）;色谱柱以外的因素（二）;色谱柱以外的因素（三）;灵敏度高 噪音低 重现性好 线性范围宽 适用范围广 容易使用及保养 各种检测器性能价格比较见书P255表4-16;衡量检测器的指标;（1） 紫外检测器;紫外吸收检测器：;(2)光电二极管阵列检测器;眨哆瞅障稳驳邹管雨绅腑潭逸伦开滚振么贴叔蕉家舱靴大巫讳褥践惺懒侈现代色谱现代色谱;光电二极管矩阵检测器示意图;矿炙仓佳俱浅枫则厌殊庭骆呻袋您旺避篮碍犀杂昨柠筒帘秩壹涣蓝泻谅叭现代色谱现代色谱;光电二极管阵列检测器;（3） 荧光检测器P262