EL及MLCK在人颈动脉粥样硬化斑块中的表达的分析研究.pdfVIP

摘要 EL及MLCK在人颈动脉粥样硬化斑块中的表达研究 硕士研究生吴成稳 导 师周志强 郑州大学第二附属医院 河南郑州450014 摘要 目前我国人民生活水平较前明显提高，饮食习惯也有了很大的改变，而由 此所导致的心脑血管疾病发病率则逐年上升，目前已经跃居各病之首。究其原 发症已严重威胁我国中老年人群的身体健康。颈动脉粥样硬化是动脉粥样硬化 在颈部血管的病理表现，其发病将直接影响脑血管血液循环，能够导致脑缺血 甚至脑萎缩，而粥样硬化斑块的破裂脱落又可造成的脑栓塞，由此给患者的生 活质量带来诸多隐患。因此，研究颈动脉粥样硬化的发病原因及机制，制定相 应的治疗措施成为目前临床迫切的需要。内皮脂肪酶(EL)是近年来新发现的 一种促AS酶，它属于甘油三酯脂肪酶基因家族，由内皮细胞合成和分泌。研究 发现，EL可以促进单核细胞及脂蛋白在血管内皮下积聚，参与影响高密度脂蛋白 代谢进而使血管壁中胆固醇外流减少，因此其与AS的发生发展关系密切。而肌 球蛋白轻链激酶(MLCK)是一种依赖于C“钙调蛋白并能促使肌动蛋白与肌球 蛋白结合的丝氨酸／苏氨酸蛋白激酶，能够使肌球蛋白轻链(MLC)磷酸化从而 使血管内皮细胞收缩及张力增加，导致血管内皮的通透性加大，进而使炎细胞 及脂质等易于渗入血管内皮并沉积，从而导致AS的发生。因此，本实验旨在从 蛋白及基因的水平研究EL及MLCK在人颈动脉粥样硬化斑块中的表达情况以 及二者在不同性质斑块中的表达差异，分析二者的病理关系。以期初步探讨二 者在颈动脉粥样硬化中的致病机理。 材料及方法： 收集自2009年11月至2011年7月在郑州大学第二附属医院及第五附属医 院血管外科行颈动脉内膜剥脱术(CEA)后颈动脉粥样硬化斑块标本40例，其中， I 摘要 男2l例，女19例，平均年龄53．6岁。所有病例术前均有短暂性脑缺血(TIA) 病史，并经彩超诊断证实。同时选取20例脾切除术后脾动脉标本作为对照组， 术前均排除动脉硬化、全身炎性疾病、肿瘤等病史。所有实验标本均经家属同 意用于科学研究。 所有标本手术取下后，液氮罐保存，备用。根据术前颈部彩超诊断标准和术 后对标本的组织病理学分析，将颈动脉粥样硬化斑块分为两组，即稳定性斑块 组(20例)和不稳定性斑块组(20例)。20例正常脾动脉组织作为对照。采用 免疫组织化学法及逆转录一聚合酶链反应(R-T-PcR)法检测粥样硬化斑块组织及 j下常动脉组织中EL、MLCK蛋白及mRNA的表达： 统计学分析：本实验结果采用SPSS17．0统计软件对数据进行处理，采用单 差异有统计学意义。 结果： 一．免疫组织化学结果： 1．EL在颈动脉粥样硬化斑块组中均有较强表达，而在对照组中有少量表达， 其染色阳性部位主要见于炎性细胞，定位在细胞质。其在不稳定性斑块组染色 强度也高于对照组(P0．01)．单因素方差分析发现三者均有统计学差异(F =81．239，P0．01)。 2．MLCK在颈动脉粥样硬化斑块组中也均有较强的表达，其染色阳性部位 见于炎性细胞的细胞质。在不稳定性斑块组染色强度最高，明显高于稳定性斑 强度呈明显的正相关关系(稳定性斑块：FO．667，PO．01；不稳定性斑块： 二．RT-PCR结果： 1．ELmRNA在不稳定性斑块组中表达量最高，明显高于稳定性斑块组 验三组之间表达均有差异(F=243．195，P0．01)。 2．MLCKmRNA在粥样斑块组织中也呈现较强表达，其中不稳定性斑块组 II 摘要 表达量最高，明显高于稳定性斑块组(P0．01)，而稳定性斑块组表达量又高于 3．采用pearson相关分析显示二者在斑块组中表达呈现正相关(稳定性斑块： 1)。 (r=0．299，p=0．20 结论： 1 EL及MLCK在人颈动脉粥样硬化的发生、发展