L-选择素单克隆抗体对缺血-再灌注损伤皮瓣保护作用.docVIP

L-选择素单克隆抗体对缺血/再灌注损伤皮瓣保护作用[摘要]目的：探讨L－选择素单克隆抗体在缺血／再灌注损伤皮瓣中的作用。方法：在大鼠缺血／再灌注损伤皮瓣模型，分别应用L－选择素单克隆抗体观察皮瓣成活面积及组织改变。结果：术后7天时皮瓣成活面积分别为：假性实验组为100％；生理盐水对照组为(18.3±19.6)％；实验组为(85.63±22.05)％。组织学观察发现：生理盐水对照组有大量的炎细胞浸润、组织肿胀、大部分皮肤组织坏死；L－选择素单克隆抗体使用实验组则炎症症状明显减轻、坏死组织减少，基本与假性实验组近似。结论：L－选择素单克隆抗体可以明显减轻缺血／再灌注损伤，从而提高缺血／再灌注损伤皮瓣成活面积。 [关键词]缺血／再灌注损伤；皮瓣；L－选择素单克隆抗体 [中图分类号]R622　[文献标识码]A　[文章编号]1008－6455(2007)05－0593－03 缺血／再灌注损伤(I/R)是对于曾经发生过缺血的组织，重新开放血流时，组织的缺血状态不但没有改善，反而更加加重，此乃缺血／再灌注损伤的主要特征。由于其发病机制复杂，尚不十分清楚，因而成为很多学者关注的热点。目前已有资料表明：能量代谢异常、氧自由基产生增加、钙离子超负荷等在其损伤中起着重要作用。近年来的研究发现中性粒细胞在缺血／再灌注损伤中发挥着极为重要的作用，而L－选择素是调节这种作用的关键因素，本实验使用L－选择素单克隆抗体，来观察对缺血／再灌注损伤皮瓣的保护作用。 1　材料和方法 1.1　实验材料：动物分组：36只Sprague－Dawley雄性大鼠(日本昭和大学医学部动物中心提供)，体重225～250g，分三组，分别为假性实验组、生理盐水对照组及实验组(L－选择素单克隆抗体使用组)动物，每组各12只。 1.2　模型制备：于大鼠腹部制备35mm×45mm腹壁浅血管岛状皮瓣，用显微外科用的静脉夹阻断股动静脉(因腹壁浅动静脉较细小，钳夹时损伤较大，故阻断分出腹壁浅血管前的股血管即可)，9h后去除血管夹开放血流，形成缺血／再灌注损伤皮瓣模型。而假性实验组只掀起皮瓣而未阻断血管形成缺血改变。 1.3　抗体使用：再灌注前15min，L－选择素单克隆抗体0.20mg/kg，稀释至0.5ml。而对照组则给予生理盐水O.5ml，均由尾静脉注入。 1.4　观察内容 1.4.1　皮瓣成活面积：术后7天观察的成活面积，硫酸纸描绘出成活与坏死的面积，摄像机拍摄后用图像采集卡输入计算机，用自编的程序测算皮瓣成活与坏死的面积占整个皮瓣的百分数，表示为：皮瓣成活率(％)＝[皮瓣成活面积(cm2)／整个皮瓣面积(cm2)]×100。 1.4.2　组织学观察：术后7天切取整个皮瓣，用10％甲醛固定、切片、HE染色，行组织病理学观察。 1.5　统计学分析：所有结果均用x±s表示，皮瓣成活面积用SAS统计软件进行t检验分析 2　结果 　2.1　皮瓣成活面积：假性实验组皮瓣无坏死，生理盐水对照组开放后皮瓣颜色差，而注射了L－选择素单克隆抗体的皮瓣在血流开放后约1min就能看到皮瓣的颜色有明显的改善；l周时皮瓣的成活面积：假性实验组为100％；生理盐水对照组为(18.3±19.6)％；实验组为(85.63±22.05)％。两组间有显著性差异(P＜0.01)。 2.2　组织学观察：假性实验组组织结构正常、无异常表现；而生理盐水对照组有大量的炎细胞浸润、组织肿胀、部分皮肤组织坏死，失去正常的组织结构；而L－选择素单克隆抗体使用实验组则炎症症状明显减轻、坏死组织减少，基本与假性实验组近似。 3　讨论 缺血／再灌注损伤的主要原因之一，与白细胞导致的缺血组织的损伤、以及与血管内皮细胞的粘附有关。中性粒细胞进入缺血组织后被激活，释放大量毒性氧自由基和蛋白水解酶，致血管通透性增加、组织水肿等一系列病理变化；同时被激活的白细胞粘附于血管内皮，主要在毛细血管前括约肌和后微静脉引起损伤，不能通过毛细胞血管前括约肌的白细胞发生堆积、阻塞毛细血管、加重缺血损伤。 选择素是由在氨基酸末端的钙离子依赖的凝血素区、类上皮生长因子区、补体调节蛋白中发现的重复区、跨膜区和胞浆尾区所组成，分为E－、P－、L－选择素三个成员。L－选择素广泛表达于多种白细胞，包括中性粒细胞、单核细胞、血液和骨髓中的大部分T、B细胞及一部分自然杀伤细胞。研究表明，L－选择素成簇地存在于静止的中性粒细胞微绒毛顶端或膜的皱褶部位，这可能有利于L选择素与其内皮细胞配体的及早接触。与另外二种选择素不同，即使没有受到刺激，白细胞表面也有表达，其配体为活性化血管内皮细胞上的糖基化依赖性细胞粘附分子(GlyCAM－1)。 实验证明，L－选择素在白细胞的移出与移行中发挥