MMP-9及COX-2在肾癌组织中表达水平及临床意义.docVIP

MMP-9及COX-2在肾癌组织中表达水平及临床意义【摘要】 目的 探讨肾癌患者肿瘤组织中基质金属蛋白酶9（MMP-9）及环氧合酶2（COX-2）的表达水平及其临床意义。方法 收集50例肾癌患者术后癌组织及20例肾良性病变手术后的肾组织（均经术后病理及影像学等检查确定），并按相应步骤进行切片，分别采用免疫组织化学PV6000两步法测定肾肿瘤组织中两种肿瘤标记物的表达水平，并进行统计学分析。结果 肾癌患者肿瘤组织中的MMP-9及COX-2水平均较良性对照组染色明显（P＜0.05）。其中肾癌组MMP-9的阳性率为86%，而COX-2在肾癌组中的阳性率为82%，二者表达水平明显呈正相关（r=0.039，P＜0.05）。结论 肾癌组织中MMP-9及COX-2都存在着过度表达，且二者均随肿瘤病理分级的增高而表达进一步强烈，证明二者在肾癌的发生、发展、浸润及转移中发挥重要作用 【关键词】 肾癌；基质金属蛋白酶9；环氧合酶2 肾细胞癌（RCC）是泌尿系统常见肿瘤，在各种泌尿系统肿瘤中其发病率仅次于膀胱癌居第二位，其生物学特征多变，易复发和转移，同时也是全身多发的实质脏器恶性肿瘤之一。其临床早期诊断及治疗一直是医学界研究的热点和难题。近年来，环氧合酶-2（COX-2）和基质金属蛋白酶-9（MMP-9）在RCC发展中的作用日益受到人们的关注。本项研究利用免疫组织化学法对肾癌组织中的COX-2及MMP-9表达进行测定，同时结合肾癌的临床病理等方面特征，探究二者在肾癌发展过程中的作用和意义，旨在为肾癌的早期诊断及分子水平研究提供依据。1 资料与方法 1.1 一般资料 1.1.1 肾癌组 收集青岛大学医学院附属医院2010年3月至2011年4月间手术切除且经病理诊断为原发性肾癌的手术标本50例，以AJCC（2002版）的TNM分期为标准，其中T1期患者28例，T2期患者15例，T3期患者6例，T4期患者1例；其中男32例，女18例，年龄36-68岁，平均（52.7 8.1）岁。所有患者均排除外伤、严重的感染性疾病或者其他系统疾病。 1.1.2 对照组 肾良性及健康对照组20人，均为我院经检查后确诊者，其中肾结石6人，肾囊肿10人，因外伤行肾部分切者4人（经影像学及实验室检查，最后经手术予以确定）。所有患者均排除心肺、肠胃等重要脏器疾病，肝肾功能试验正常，无肿瘤家族史。所有参选病人均经实验室和物理检查、腹部超声、及螺旋CT等检查诊断。 1.1.3 标本采集 免疫组织化学所需标本均经自青医附院病理科获得，经一名经验丰富的技师4μm切片备用。 1.2 检测方法 1.2.1 仪器及试剂 显微镜为德国Leica 4000B荧光倒置显微镜，一抗分别为兔抗人基质金属蛋白酶9多克隆抗体，兔抗人环氧合酶。 1.2.2 单克隆抗体、磷酸盐缓冲液（PBS），DAB显色试剂盒，PV6000即用型免疫组化染色试剂盒。以上试剂均购自北京中杉金桥生物技术有限公司。免疫组化操作步骤按照说明书进行。 1.2.3 采用PV6000两步法测定组织中COX-2及MMP-9水平：经4μm切片的组织标本脱蜡入水，其操作过程严格按说明书进行。MMP-9判读标准：染色阳性为胞浆内出现棕色和棕黄色，显微镜下组织被染成棕黄色的为阳性（+），其阳性细胞数＜40%；成棕色为阳性（++），其阳性细胞数40%-80%；成深棕色（+++），其阳性细胞数＞80%；组织没有着色为阴性［1］。COX-2判读标准：阳性表达定位于细胞浆，呈浅黄色至深棕色，阳性判定标准依据阳性细胞数和阳性反应强度两项指标，阳性着色数＞10%定位阳性表达，阳性反应强度为浅黄色为弱阳性定位（+）、黄色或者棕黄色为中等阳性定为（++）、棕色或者深棕色定为强阳性定为（+++），无棕黄色或者背景着色一致为阴性［2］。 1.3 统计学方法 检测结果采用SPSS软件处理，组间比较行X2检验，两因素间采用非参数检验的Spearman相关分析，显著性检验均为双侧检验，显著性水平设定为P﹤0.05。2 结 果 2.1 MMP-9及COX-2在肾癌组中的表达水平 二者在肾癌组的表达（见表1），经X2检验可以得出二者在肾癌组检测中的阳性率无统计学差异（P＞0.05）。MMP-9定位于癌细胞膜、胞质、细胞间质和部分肿瘤组织间质中，以肿瘤细胞表达为主，见图1，而COX-2定位于癌细胞膜、胞质内，见图2；其中RCC组中MMP-9的阳性表达率为86%，COX-2的阳性表达率为82%，二者的相关性分析表明其在肾癌组中呈明显正相关（r=0.039，P＜0.05）。 表1 MMP-9及COX-2在肾癌组表达水平情况 COX-2 MMP-9 阳性（例） 阴性（例） 合计 阳性 35 6 41 阴