siRNA阻断NF-κB信号通路对肝癌细胞增殖影响.docVIP

siRNA阻断NF-κB信号通路对肝癌细胞增殖影响摘 要 目的：通过阻断肝癌细胞中NF-kappaB(NF-κB)信号通路，研究它与肿瘤细胞增殖、耐药的关系。方法：利用RNA干扰(RNAi)技术阻断NF-κB亚单位p65的表达，RT-PCR和Western blotting法检测p65的mRNA及蛋白表达，MTT法检测细胞的增殖情况，以及联合应用不同浓度化疗药5-Fu对肿瘤细胞增殖的影响。结果：NF-κB的亚单位p65在肝癌细胞质中高表达，p65siRNA可有效地阻断蛋白表达。结论：应用RNAi 技术可以有效地干扰p65表达，抑制肝癌细胞增殖，增强对化疗药5-Fu的敏感性。 关键词 肝细胞 癌 NF-κB RNA干扰 siRNA 资料与方法 细胞系及细胞培养：肝癌细胞系HepG2购自中国科学院上海生化所。细胞在含有10%胎牛血清，100U/ml青霉素，100μg/ml链霉素的1640培养液(Gibco公司)中于37℃、5%CO?2条件下培养，实验细胞均处于对数生长期。 抗体和试剂：鼠抗人p65(sc-8008)单克隆抗体和NF-κB p65 siRNA干扰试剂盒购自Santa Cruz Biotechnology 公司，MTT购自Sigma公司。 siRNA的转染：按照Santa Cruz Biotechnology公司siRNA干扰试剂盒说明书的要求