人肉芽组织内周皮细胞CD13及Collagen Ⅰ表达.doc

人肉芽组织内周皮细胞CD13及Collagen Ⅰ表达[摘要]目的：观察人肉芽组织内周皮细胞CD13和Collagen Ⅰ的表达情况。方法：采用免疫组织化学双染的方法观察周皮细胞与新生血管的关系以及CD13和Collagen Ⅰ的表达，并用Image c图像分析软件分析实验结果。结果：内径在14－19μm的新生血管周围无周皮细胞的表达，而内径在22－65μm的新生血管存在周皮细胞。人肉芽组织新生血管周围的周皮细胞表达CD13、Collagen Ⅰ和Desmin，肉芽组织内的新生血管周围不存在CD13-/Desmin+细胞，且CD13阳性细胞仅存在于血管内皮细胞周围。结论：人肉芽组织内的周皮细胞表达CD13和collagen Ⅰ；肉芽组织内血管新生过程中，血管内皮细胞的迁移先于周皮细胞的分化；周皮细胞的前体细胞自骨髓入血后与肉芽组织内的血管内皮细胞粘附并迁移到血管腔外，并紧邻血管内皮细胞分化为周皮细胞；周皮细胞参与了肉芽组织细胞外基质的合成，且Collagen Ⅰ参与了新生血管的稳定与改建。 [关键词]周皮细胞；血管内皮细胞；血管新生；细胞分化 [中图分类号]Q813.1　[文献标识码]A [文章编号]1008－6455(2007)07－0878－03 血管新生(angiogenesis)参与了机体众多的病理及生理过程。存在血管新生的生理过程包括创面愈合、胎盘生长等。存在血管新生的病理过程包括实质性肿瘤的生长与转移、关节炎、麻风病、增生性瘢痕和瘢痕疙瘩的形成等。在增生性瘢痕和瘢痕疙瘩的形成以及肿瘤的研究中，血管新生的研究受到了极大重视。 由于周皮细胞对血管腔的形成、新生血管的稳定、血管的改建和血管功能方面均有重要作用，因而针对周皮细胞的基础研究对于揭示血管新生相关疾病的发病机理和临床治疗具有重要意义。目前已经证明周皮细胞来源于骨髓，但其具体的前体细胞及其分化的机理仍不清楚。为进一步揭示周皮细胞的分化机理，我们进行了系列研究，本文仅涉及周皮细胞CD13和Collagen Ⅰ的表达。本文通过观察CD13在肉芽组织内的表达，研究周皮细胞的前体细胞在血管新生过程中的迁移过程；并通过观察Collagen Ⅰ的表达，观察血管新生过程中周皮细胞与细胞外基质的关系。 1　材料和方法 1．1　人烧伤创面肉芽组织的取材：烧伤创面肉芽组织来源于6名烧伤患者，男性3名，女性3名。年龄22－35岁，平均(27.5+4.85)岁。烧伤深度均为深Ⅱ度，烧伤部位为手背烧伤3例，前臂烧伤2例，胸部烧伤1例。所有患者除存在深Ⅱ度烧伤外，无其他系统严重疾病。烧伤创面总面积为体表的8％－15％，半均(11.0+2.90)％。在伤后29－42天(平均36.2+4.79天)创面植皮时，收集2mm×2mm×1cm肉芽组织。标本分为两部分，一部分肉芽组织立即进行细菌计数(细菌数为3.2×103－2.1×104CFU/g组织，细菌数指数平均为3.91+0.292)，一部分肉芽组织用4％多聚甲醛固定，常规包腊块。 1．2　人肉芽组织中周皮细胞内Desmin的表达：标本常规包腊块，制成5μm切片。采用北京中山生物工程有限公司的HistostainTM－DS双染试剂盒，按说明书对标本内的Desmin和yon willebrand因子(vWF)进行染色。第一抗体为小鼠抗Desmin单克隆抗体(福建迈新生物科技公司)，第二抗体为兔抗vWF多克隆抗体(福建迈新生物科技公司)。染色后采用Nikon TE2000S显微镜(400×视野)、DS－SMC Camera Head、Nikon Digital Sight DS－U1和ACT-2U软件对切片的8个400×视野进行采图，用Image C软件对血管内径进行测量，分别计算Desmin阴性血管内径平均值和有Desmin阳性血管内径平均值。 1．3　人肉芽组织周皮细胞对CD13和Collagen Ⅰ的表达：将每个标本进行连续5μm切片。每个标本各选取3张连续切片进行实验。采用北京中山生物工程有限公司的HistostainTM－Ds双染试剂盒，按说明书对分别标本内的CD13和vWF、Desmin和vWF、collagen Ⅰ和vWF进行染色。第一张切片的第一抗体为小鼠抗CD13单克隆抗体(福建迈新生物科技公司)，第二抗体为兔抗vWF多克隆抗体。第二张切片的第一抗体为小鼠抗desmin单克隆抗体，第二抗体为兔抗vWF多克隆抗体。第三张切片的第一抗体为兔抗Collagen Ⅰ多克隆抗体(武汉博士德生物科技有限公司)，第二抗体为兔抗vWF多克隆抗体。按说明书进行染色，染色后对细胞核进行复染。染色后采用Nikon TE2000S显微镜(400×)、DS－5MC Camera Head、Nikon Digita