分子基因水平上中医药防治肝癌实验探究现状及展望 .doc

分子基因水平上中医药防治肝癌实验探究现状及展望 摘　要：肝癌是我国常见的恶性肿瘤之一，随着分子生物学理论和技术在肿瘤领域的应用，极大的丰富了肿瘤的研究内容。中医药在对肝癌的实验研究中也充分利用了这些理论和技术，如中药对癌基因和抑癌基因的影响，诱导肝癌细胞凋亡，中药诱导分化作用，中药对端粒酶的影响，中药诱生TNF等细胞因子的作用，中药对拓扑异构酶的影响，中药对P糖蛋白的抑制作用以及血管生成基因VEGF的表达等，通过这些研究进一步从分子基因水平证实了中医药具有抑制肝癌发生、发展的作用，并且对于研究中医药的抗癌机理、筛选有效抗癌中药具有重大意义。 关键词：肝癌；分子基因水平；中医药实验 原发性肝癌是我国常见的恶性肿瘤之一，在恶性肿瘤死亡顺序中仅次于胃癌、食道癌。近年来由于分子生物学理论和技术的飞速发展，人们对肿瘤的认识和理解发生了很多改变，因而极大地丰富了肿瘤研究的内容。在肝癌研究方向，对肝癌的病因学、相关基因、转移复发机制、信号传导、生物治疗等方面已具有较高的水平。中医药防治肿瘤的研究如何引进和利用这些新成果、开辟中西医结合研究领域的新篇章，是目前值得研究的课题。文章就分子基因水平上中医药防治肝癌的实验研究现状进行综述。 1 对癌基因和抑癌基因的影响 现在认为肝癌是一种多因素、多步骤演进的多基因改变的疾病。涉及癌基因的激活及抑癌基因的失活。癌基因的定义可以归纳为：在体外能引起细胞转化、在体内能诱导肿瘤的基因。而能够限制细胞增殖，其缺失或失活有利于肿瘤发生，则称为抑癌基因…。在肝癌的分子发病机制中，乙肝病毒相关基因和丙肝病毒相关基因是参与肝癌发病的主要病毒相关基因，至少有N－raft、C―fms、C-mvc、C--ets-2、胰岛素样生长因子Ⅱ(IGF-Ⅱ)、IGF-Ⅱ受体、集落刺激因I受体(CSFIR)等癌基因，与肝癌的发生和发展有关，与肝癌有关的抑癌基因有Rb基因、p53、DCC、WT-1、APC、mm23、PTEN等。许多中药单味或复方具有抑制癌基因和/或激活抑癌基因表达的作用。刘竖等采用药物血清和细胞药理学方法研究中药复方搏癌丸(搏癌丸由黄芪、叶下珠、姜黄、龙葵、莪术等组成)对人肝癌细胞HepG2周期及相关调控基因表达的影响，结果10％搏癌丸药物血清作用Hep G2细胞48h后，流式细胞仪检测的细胞凋亡率为25.34％，均显著高于相应无药血清对照组的3.64％，免疫组化染色观测到bax阳性表达细胞数和p53阳性细胞表达数增多增强，说明搏癌丸能上调Hep G2细胞凋亡调控基因bax、p53的表达，与无药血清对照组比较，差异有显著性意义，P＜0.05，且呈剂量依赖关系。不同中医治法能够不同程度地调节肝癌发生发展过程中一些重要癌基因的转录。管冬元等在研究清热解毒、活血化瘀、健脾理气3种中医治法对大鼠肝癌的作用机理及其差异中观测到，不同治法能够针对性地调节癌基因Ras的转录水平，其中清热解毒法和活血化瘀法对N-ras基因、健脾理气法对H-rss和K-tas基因的转录水平都有显著的下调作用，不同治法对大鼠肝组织AFP基因转录有不同程度的下调作用，其中清热解毒法作用最强。 2　诱导肝癌细胞凋亡 细胞凋亡与细胞增殖是一对并存的矛盾，正常情况下两者处于动态平衡，细胞凋亡与肿瘤发生关系密切，肿瘤过快过多的生长是由于肿瘤细胞过少的死亡和过多繁殖的结果。其机制目前认为与机体免疫反应、宿主因子、癌前细胞凋亡机制等多方面有关。开发具有诱导肿瘤细胞凋亡作用的单味及复方中药具有重要的应用前景。马靖等研究甘草的抗癌作用中观察到，肝癌Hop G2细胞经0.75mg/mL、甘草提取物作用22h后，出现细胞皱缩、变圆、变黑、部分细胞浮起等典型的凋亡细胞形念变化特征，荧光显微镜观察细胞核染色质形成明亮的凝聚块，流式细胞仪可检测到Gl峰前的亚G1峰即凋亡峰，细胞内游离钙随作用时间延长明显升高，线粒体膜电位急剧下降，并长时间维持在下降趋势。 3　中药诱导分化作用 从发育生物学观点分析肿瘤，认为分化障碍是肿瘤细胞的一个重要生物学特征，由于正常基因功能受控与错误的表达程序导致肿瘤发生。肿瘤细胞在不同程度上缺乏成熟的形态和完整的功能，丧失某些中未分化细胞的性状，并常对正常的分化调节机制缺乏反应。通过分化诱导剂可以将肿瘤细胞朝分化方向逆转，使其朝良性或正常细胞分化。曾小莉等则从形态学和生化代谢两方面，观察了400μg/mL人参总皂苷(G―Rh2)对人肝癌细胞HepG2的诱导分化作用，发现癌细胞经处理后，在形态学上出现了向正常肝细胞方向逆转的现象，生长受到明显抑制；生化代谢上ALP活性明显升高(P＜0.01)，而AFP合成明显下降(P＞0.01)；此后又发现SMMC-7721细胞在10.20μg/mLG-Rh2作用下，AFP