化疗药羟基喜树碱等及加味逍遥散结合治疗肝癌实验探究及临床.doc

化疗药羟基喜树碱等及加味逍遥散结合治疗肝癌实验探究及临床关键词 羟基喜树碱 氟尿嘧啶 加味逍遥散 HepG2肝癌 抑瘤作用 癌基因 资料与方法 药物与试剂：加味逍遥散(当归、白芍、柴胡、白术、茯苓、生姜各15g，甘草10g，白花蛇草、半枝莲、黄芪各30g)煎成200%浓度即每ml含2g生药，高压蒸气灭菌后备用。羟基喜树碱，5-氟尿嘧啶，Ki-67抗体购自北京中山金桥生物制品有限公司。 实验动物：裸小鼠，6周龄，体重16~20g， 瘤株：肝癌(HepG2)肿瘤细胞细胞株，由哈医大附属第三医院肿瘤研究所提供。用生理盐水稀释成细胞数3×106/ml备用。 统计学方法 采用SPSS统计软件，各组统计方法为两样本的t检验。 方法：①模型制备[1]将已制备好的人肝癌瘤株(HepG2)悬液(细胞数3x106/ml)0.2ml注入裸鼠背部皮下制成肝癌裸鼠模型。②实验分组：将15只6周龄裸小鼠(体重16~20g)随机分为生理盐水组，羟基喜树碱+氟尿嘧啶+加味逍遥散组(综合组)及羟基喜树碱+氟尿嘧啶组(化疗组)。每组5只，于种瘤5天后开始给药。给药期间，生理盐水组：生理盐水0.2ml/(只)腹腔注射连续10天；综合组：羟基喜树碱0.25ml/(只)及氟尿嘧啶0.1ml/(只)腹腔注射连续5天，同时给予加味逍遥散0.2ml/(只)灌胃连续10天。化疗组：羟基喜树碱0.25ml/(只)，氟尿嘧啶0.1ml/(只)[2]腹腔注射连续5天。用药期间观察各组裸鼠的自主活动、精神状态、饮食及对外界刺激的反应。各组均于停药后次日处死裸鼠。 标本处理 处死动物后剥取肿瘤组织称重按下列公式计算抑瘤率[3]。 抑瘤率(%)=(对照组平均瘤重-给药组平均瘤重)/对照组平均瘤重×%，用LASAB免疫组化法检测裸鼠肝癌组织中的增殖细胞核抗原(Ki-67)的表达情况。观察制片后Ki-67的表达，随机观察10个高倍镜视野，计每个高倍镜视野100个肿瘤细胞中的阳性细胞数(细胞核染成棕黄色或棕褐色为阳性细胞)，以平均数计量。 结 果 对荷瘤裸鼠的抗肿瘤作用：表1示模型裸鼠处死后剥瘤称重，各治疗组与生理盐水组比较瘤重有显著差异(P0.01)表明加味逍遥散有明显抑制肿瘤作用，尤其与化疗药合用效果更加明显。 对生存质量的影响：化疗组和生理盐水组的裸鼠消瘦明显，不愿活动，食量明显减少，对外界刺激的反应迟钝。而综合组的裸鼠食量增加，活泼好动，对外界刺激反应敏锐。表明加味逍遥散具有减低化疗不良反应、改善生活质量的作用。 对荷瘤裸鼠肿瘤组织Ki-67表达的影响。表2示肝癌裸鼠生长过程中呈现 Ki-67的过表达，综合组治疗后Ki-67的表达降低。综合组与生理盐水组比较有显著差异(P0.01)而与化疗组比较也有显著差异(P0.05)，表明加味逍遥散能有效遏制Ki-67的表达。 典型病例：男，50岁，铁路工人，住院时间2005年10月17日。诊断：原发性肝癌，硬化型。病理诊断(肝穿)为肝细胞癌。中医分型：肝郁脾虚型。主要症状：肝区疼，食少便稀，乏力消瘦。化验AFP170.67ng/ml,HBsAg阳性，MIR诊断：原发性肝癌肿瘤直径为5.6cm×5.3cm×4.2cm。通过3个周期的化疗(每周期羟基喜树碱10mg静脉滴注连用7天及氟尿嘧啶750mg静脉滴注连用5天)并加服加味逍遥散治疗，症状明显好转，食量明显增加，体力增强，肝区疼明显好转，化疗期间未出现明显不良反应。2006年1个月复查MIR回报：肝癌肿瘤直径为1.6cm×1.4cm×0.9cm。临床疗效达PR。之后又行2周期化疗后，于2006年4月行介入治疗，又做CT检查报告：肿瘤消失(附化疗前后MIR片)。讨 论 加味逍遥散具有“健脾益气”、“调正补虚”、提高机体免疫力的作用。细胞周期的G1-S-G2-M期相互转换过程中存在多个“关卡”并受Ki-67等多种基因的控制。这些基因的异常表达可导致基因组不稳定或原本停止增殖的细胞越过关卡进入细胞增殖期导致细胞周期失控并恶性增殖形成癌肿。Ki-67指数与肿瘤分期、疗效、预后有密切关系。可作为反映细胞增殖状态的指标，并可作为判断疗效的根据。我们实验研究发现HepG2肝癌裸鼠肝癌组织中存在Ki-67的过表达，从而促进了肝癌的发生发展 。治疗后这种过表达得到了有效的遏制。综合组与生理盐水组比较有显著差异(P0.01)，而与化疗组比较也有显著差异(P0.05)，这表明加味逍遥散抑制肝癌细胞生长与抑制Ki-67有关。与化疗药结合应用效果更佳。 总之，实验结果显示加味逍遥散具有显著的抑瘤作用，并具有减低化疗不良反应改善生活质量的作用。可通过调节Ki-67的表达而达到治疗目的。 参考文献 1 徐静，李旭.肝癌动物