同种异体耳移植实验探究.doc

同种异体耳移植实验探究[摘要]目的:①观察同种异体兔耳移植后排斥反应的组织病理学、细胞免疫、体液免疫变化的情况;②为提高同种异体移植耳成活率,预防排斥反应,提供一个有效的免疫抑制治疗方案。方法:以青紫蓝兔和日本大耳白兔为实验动物。以耳大动、静脉及外侧耳缘静脉为蒂,获得单侧(右)全耳,应用显微外科微血管吻合技术进行异体移植。其中青紫蓝兔为受体,日本大耳白兔为供体。实验共选用40对(青紫蓝兔和日本大耳白兔各40只)动物,按受体免疫抑制剂治疗方案随机分为5组:O组,手术对照组(N=5对),行自体兔耳离断回植术;C组,对照组(N=5对),同种异体耳移植后不给予免疫抑制剂;T1组(N=10对),同种异体耳移植后给予FK506单一免疫抑制剂;T2组(N=10对),同种异体耳移植后给予FK506 和强的松两联免疫抑制剂;T3组(N=10对),同种异体耳移植后给予FK506、MMF和强的松三联免疫抑制剂。动脉、静脉吻合均选用端端吻合技术。术后观察移植耳存活情况、急性排异发生率及严重程度;供体组织病理分级;受体血浆IL-2、IL-4、 IL-8的变化以及受体T淋巴细胞CD4+、CD8+的变化。结果:同种异体兔耳移植30天、100天后T3组在急性排斥反应发生率、供体组织病理分级和受体IL-2、IL-4、 IL-8水平与CD4、CD8值的变化等方面与C组、T1组、T2组相比较均有显著差异(P 随着新型、高效免疫抑制剂的问世,器官移植得到了飞速的发展,同种异体复合组织移植也取得了令人瞩目的进展,但是同种异体复合组织移植尚存在操作技术、排斥反应、伦理道德等诸多问题。本研究利用兔耳移植模型,旨在探讨同种异体兔耳移植后排斥反应的病理学变化与细胞免疫、体液免疫的变化,研究制定有助于提高移植耳成活率,预防排斥反应的免疫抑制方案,为临床上成功实施同种异体耳移植提供有益的实验基础。 1材料和方法 1.1 实验动物:选用体重均等的40只青紫蓝兔和40只日本大耳白兔为实验动物。体重(1.9±0.1)kg,3月龄,雌雄不限,均购于兰州生物制品研究所动物实验科,由专人负责单笼封闭式饲养。以青紫蓝兔为受体,日本大耳白兔为供体(图1)。 1.2 主要实验试剂:CD4、CD8鼠抗兔试剂盒,购于英国SEROTEC公司, IL-2、IL-4、IL-8鼠抗兔试剂盒,购于美国ADL公司,他克莫司(FK506)胶囊购于英国Aslcllns Ireland 公司,吗替麦考酚酯胶囊(MMF)购于上海罗氏制药有限公司,醋酸泼尼松购于浙江仙琚制药股份有限公司。 1.3 同种异体兔耳移植模型的建立:2%戊巴比妥钠(30mg/kg)耳缘静脉麻醉后,沿供体右耳根处环形剪开皮肤,分离皮下组织,将内侧耳缘静脉与外侧耳缘静脉分支结扎,分离出外侧耳缘静脉、耳大静脉、耳大动脉,将受体同法分离出右耳外侧耳缘静脉,耳大静脉,耳大动脉,血管夹依次阻断血流,剪断血管后用组织剪沿耳根离断受体右耳,结扎出血点,盐水纱布湿敷创面;供体耳大动脉,耳大静脉,外侧耳缘静脉血管夹阻断血流后,依次剪断血管,用组织剪沿耳根剪断右耳;将供体耳软骨与受体耳根软骨对位,先于外侧耳缘静脉旁软骨处缝合固定,再将内侧耳缘静脉旁软骨缝合固定,再在耳大动脉旁固定耳软骨后,间断对位缝合固定耳软骨。将供体颧耳肌与受体耳根颧耳肌对位拉拢缝合,保证术后移植耳竖立。显微镜下将对位的血管旁皮下组织间断缝合固定后,分别吻合外侧耳缘静脉,耳大静脉,耳大动脉,均行端端吻合。吻合毕,依次放开耳大动脉、耳大静脉、外侧耳缘静脉血管夹,即见动脉搏动良好,两根静脉充盈明显,行勒血试验,见动静脉血流通畅,移植耳血运良好,全层缝合皮肤关闭切口(图2)。 1.4 实验分组与免疫抑制剂的应用 1.4.1 实验分组:将40只青紫蓝兔与40只日本大耳白兔按体重大小与耳大小配对,然后按受体应用免疫抑制剂的不同分为5组。O组:手术对照组(N=5对),行自体兔耳离断回植术;C组:对照组(N=5对),异体移植后不给予免疫抑制剂;T1组:(N=10对)异体移植后给予FK506;T2组(N=10对):异体移植后给予FK506 +强的松两联免疫抑制剂;T3组(N=10对):异体移植后给予FK506+MMF+强的松三联免疫抑制剂。 1.4.2 免疫抑制剂的应用:术前1天晚8点及术前30min各组试验动物依据分组不同应用不同的免疫抑制剂,各给药一次。药物及用量分别为:T1组,FK506 0.2 mg/kg;T2组,FK506 0.2 mg/kg,强的松2mg/kg; T3组,FK506 0.2 mg/kg,MMF20mg/kg,强的松2mg/kg。移植术后药物用量分别为:①强的松1mg/kg, 晚8时,1次/天。1月后降为0.5mg/kg,晚8时