正交试验法优选灯盏花素提取工艺.docVIP

正交试验法优选灯盏花素提取工艺摘要 目的：通过提取条件的研究，提高灯盏花素的提取率和纯度。方法：以中药的有效成分为指标，用单因素考察法、正交试验法选择提取条件。结果：75％乙醇，第一次加14倍量，回流80分，第二次加8倍量，提取40分为最佳提取工艺。结论：回流提取的灯盏花素得率和纯度最高。? 关键词 灯盏花素 提取 回流法?? 灯盏花又名灯盏细辛，为菊科飞蓬属植物短葶飞蓬Erigeronbreviscapus(Vant)Hand Mazz的干燥全草，其制剂可用于治疗高血压、脑溢血、脑栓塞、多发性神经炎、慢性蛛网膜炎等脑血管意外所致瘫痪症以及冠心病、心绞痛等［1，2］。其有效成分为黄酮类化合物，原工艺用乙醇冷浸提取，存在提取时间长、效率低等等问题。为了提高灯盏花素的得率和纯度，笔者用正交试验法对灯盏花素的回流提取进行了进一步的研究如下。? 1 仪器与材料? Agilent 1100高效液相色谱仪；Agilent，Zorbax Eclipse XDB-C184.6×150mm；灯盏花干燥全草(购自义乌医药公司)；乙腈为色谱纯；水为双蒸水，其余试剂为分析纯。? 2 方法与结果? 2.1 灯盏乙素HPLC测定法：测定方法如下。? 2.1.1 色谱条件：色谱柱：Agilent Zorbax Eclipse XDB-C184.6×150mm，5um；流动相：乙腈―水―磷酸(20∶80∶0.2)；流速：1ml／min；检测波长：327nm。? 2.1.2 对照品溶液制备：精密称取野黄芩苷21.76mg置100ml容量瓶中，用95％乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀即得，浓度为0.2176mg／ml作为储备液。? 2.2 提取方法的确定：有浸渍法、渗滤法、回流法提取。? 2.2.1 浸渍法提取：按均匀取样的规则称取药材40.0g，10倍量45％乙醇浸3天，滤出药液，复加6倍量45％乙醇浸3天，滤出药液，再加6倍量45％乙醇浸泡2天，过滤；合并药液共得735ml药液。室温10℃，药液离心，混匀，移取0.5ml至25ml容量瓶中，定容，过膜，待测。? 2 .2.2 渗滤法提取：按均匀取样的规则称取药材40.0g，加10倍量45％乙醇，浸泡24h，装筒、排气，再加10倍量45%乙醇筒内浸泡12h，渗滤流速1.4ml／min，共收集药液735ml。药液离心，混匀，移取0.5ml至25ml容量瓶中，定容待测。? 2.2.3 回流法提取：按均匀取样的规则称取药材40.0g，加12倍量45％乙醇，浸泡1h，水浴回流1h；加10倍量45％乙醇，水浴回流0.5h，共收集药液720ml。药液离心，混匀，移取0.5ml至25ml容量瓶中，用不加磷酸的流动相定容，过膜，待测。? 2.2.4 结果：见表1。表1表明回流法提取灯盏花素(以灯盏乙素为指标)得率最高，纯度最大，故选用回流法提取。? 2.3 提取条件考察：分乙醇浓度、正交试验法来论述。? 2.3.1 乙醇浓度的考察：方法和结果如下。? 2.3.1.1 方法：按均匀取样的规则取药材40.0g四份，每份分别加10倍量20％、40％、75％、90％乙醇，浸泡1h，水浴回流1h；第二次回流分别加8倍量20％、40％、75％、90％乙醇，水浴回流0.5h，分别收集到药液520ml、520ml、565ml、615ml。药液离心，混匀，移取0.5ml至25ml容量瓶中，用不加磷酸的流动相定容，过膜，待测。? 2.3.1.2 结果：见表2。? 2.3.2 用正交试验法优选灯盏花素回流提取工艺：按均匀取样的规则取药材40.0g九份，按正交表设计进行回流提取，药液离心，混匀，移取0.5ml至25ml容量瓶中，用不加磷酸的流动相定容，过膜，待测。? 综合评分标准：以灯盏花素提取量250mg为满分，纯度以4％为满分，综合评分按主次原则，灯盏花素含量占60％，纯度占40％。实验设计及结果见表4。? 从表4可得：A3B3C2最佳提取工艺参数为用75％乙醇，第一次加14倍量，回流提取80分钟，第二次加8倍量，回流提取40分钟。? 3 体会? 我们的研究结果表明提取120分钟比150分钟好，这可能与灯盏花素的稳定性有关，即提取一定时间(120分钟)后，灯盏花素已基本提出， 时间再增加，部分已提出的灯盏花素在此温度下分解了。另外，我们还观察到提取温度对灯盏花素的提取影响很大，在浸渍法进行提取时环境温度对提取量影响很大。在7、8月份提取(室温30℃以上)，浸渍法的提取量和回流提取法提取量相近，而2月份提取时(室温10℃)，浸渍法的提取量大大减少。? 4 参考文献? 1 云南省第一人民医院.治疗瘫痪的