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正常妊娠外周血CD4+CD25+FOXP3+Treg细胞及雌二醇水平变化探究作者单位：437500 湖北省崇阳县人民医院 通讯作者：姜玲 【摘要】 目的 探讨外周血CD4+CD25+FOXP3+Treg细胞百分率和雌二醇水平在正常妊娠整个过程中的变化。方法 采用三色荧光标记流式细胞术检测正常非妊娠健康女性（对照组），早早孕组、早孕组、中孕组、晚孕组各35例妇女外周血CD4+CD25+FOXP3+Treg细胞百分率；采用电化学发光酶免分析技术分别检测以上各对象外周血雌二醇水平。结果 对照组和早早孕组外周血雌二醇水平明显低于早孕组、中孕组、晚孕组（P＜0.05），并且随孕周增大而升高（P＜0.05）；对照组和早早孕组外周血CD4+CD25+FOXP3+Treg细胞百分率明显低于早孕组、中孕组、晚孕组（P＜0.05），并且随孕周增大而升高（P＜0.05），晚孕组略低于中孕组，但无统计学意义（P＞0.05）。结论 正常妊娠过程孕8周左右之后CD4+CD25+FOXP3+Treg细胞百分率和雌二醇水平均呈现明显升高，并且随孕周增大而升高，正常的CD4+CD25+FOXP3+Treg细胞百分率和外周血雌二醇水平在维持正常妊娠过程中发挥重要作用。 【关键词】 妊娠； CD4+CD25+FOXP3+Treg细胞； 雌二醇 CD4+CD25+FOXP3+Treg细胞是具有免疫调节功能的细胞群，通过直接免疫抑制或分泌抑制性细胞因子发挥间接免疫抑制功能，是维持机体外周免疫耐受的一个重要调控者。越来越多的研究认为，妊娠期孕妇体内CD4+CD25+FOXP3+Treg 调节性T细胞（Treg细胞）介导对胚胎产生保护性免疫应答是维持正常妊娠的重要保障，并在诱导和维持母胎免疫耐受中起重要作用［1,2］，而雌二醇则可能是让在耐受环境下激活的CD4+细胞转向FOXP3+Treg的信号［3］。因此，本研究就正常非妊娠女性及妊娠妇女各阶段外周血雌二醇水平和Treg细胞数量比例增殖和恢复展开讨论，探讨外周血Treg细胞数量和雌二醇水平变化与维持正常妊娠的关系。 1 资料和方法 1.1 一般资料 妊娠组分为早早孕组、正常早孕组、正常中孕组和正常晚孕组，各35例，孕周依次为7周以内、8～12周、13～23周和24周以上，孕妇年龄25～34岁，平均28岁，全部孕妇均选取来自笔者所在医院定期产检的孕妇，既往无死胎、自然流产、放射性职业、自身免疫性疾病史。同时排除内分泌、解剖结构、染色体异常病例。对照组即正常非妊娠组35例，年龄26～33岁，平均29岁，均随机选取来笔者所在医院正常体检女性，均有妊娠史，既往无死胎、自然流产、放射性职业、自身免疫性疾病史，同时排除内分泌、解剖结构、染色体异常病例。 1.2 主要仪器和试剂 采用德国ROCH公司2010型电化学发光仪和美国COULTER公司生产的EPICSXL型流式细胞仪，雌二醇试剂采用ROCH公司电化学发光配套试剂，eBioscience公司提供的小鼠抗人CD4、CD25和FOXP3荧光抗体和同型对照检测试剂。 1.3 试验方法 1.3.1 外周血雌二醇水平检测 取上述各研究对象静脉血2 ml置于无菌干燥管内，静置30 min后离心4000r/min，离心5 min分离出血清，严格按照ROCH公司2010型电化学发光仪操作规程检测雌二醇水平。 1.3.2 外周血CD4+CD25+FOXP3+Treg细胞百分率检测 采用标准全血裂解法，取上述各研究对象静脉血2 ml置于肝素抗凝管，充分混匀后各取100 μl细胞悬液，分别加入CD4-FITC和CD25-PE各15 μl，混匀后避光孵育30 min，离心去上清，加入固定破膜剂，混匀后避光放置20 min，离心去上清，取100 μl Hank’s液重悬、15 μl PE-Cy5-FOXP3单克隆体抗，混匀后避光放置30 min，严格按照COULTER EPICSXL型流式细胞仪操作规程检测CD4+CD25+FOXP3+Treg细胞比例。同时分别用PE-IgG1、FITC-IgG1、PE-Cy5-IgG1抗体作同型对照实验。 1.4 统计学分析 采用SPSS 15.0软件包进行实验数据的统计分析。各妊娠组与对照组比较和早、中、晚孕组与早早孕组的比较均采用成组设计t检验，各妊娠组间比较采用方差分析和SNK-q检验，各组数据以均数±标准差（x±s）表示，P＜0.05表示差异有统计学意义。 2 结果 从结果比较发现，外周血CD4+CD25+FOXP3+Treg细胞百分率，对照组（8.54%±2.90%）和早早孕组（9.32%±1.96%）明显低于早孕组（13.38%±3.35%）、中孕组（19.33