活血化瘀法对腰椎间盘突出症动物模型中PLA2水平影响.docVIP

活血化瘀法对腰椎间盘突出症动物模型中PLA2水平影响摘要 目的：观察活血化瘀法对腰椎间盘突出症动物模型髓核中磷脂酶A2(PLA2)水平的影响，借以探讨活血化瘀法治疗腰椎间盘突出症的抗炎作用机理。方法：采用Key和Ford法建立腰椎间盘突出症动物模型。造模成功后，随机将动物分为活血化瘀法治疗组、生理盐水空白对照组和扶他林对照组。治疗后2、4、6周取L4／5间的髓核，采用微孔比色法测定PLA2活性。结果：治疗组在2、4、6周均有降低PLA2活性的作用，尤其在4周后与空白对照组比较，有显著性差异，P＜0.05，P＜0.01；与对照组比较，无显著性差异。结论：活血化瘀法具有降低腰椎间盘突出症动物模型髓核中PLA2活性的作用。? 关键词 活血化瘀法 腰椎间盘突出症 动物模型 磷脂酶A2?? 腰椎间盘突出症中腰腿痛产生的机理至今未能阐明，近年来大量研究表明磷脂酶A2(简称PLA2)在突出的椎间盘组织中呈非常高的活性。临床运用活血化瘀法治疗腰椎间盘突出症取得很好疗效，有效率常达90％以上［1］。本文观察了活血化瘀法对腰椎间盘突出症动物模型髓核中PLA2活性的影响，借以探讨活血化瘀法治疗腰椎间盘突出症的作用机理。? 1 材料和方法? 1.1 实验动物：2～2.5kg普通清洁级大白兔36只，雌雄不限，由浙江中医学院实验动物中心提供并饲养。? 1.2 实验药物与制备：所用中药材均购于浙江省中医院，中药按活血化瘀法经典名方身痛逐瘀汤加减(秦艽、桃仁、红花、甘草、川芎、当归、赤芍、丹参、香附、牛膝、地龙、防己)按原方比例配齐药味，加水淹没药物，浸泡30min。水煎2次合并药液，过滤浓缩为6.3g／ml(由浙江中医药大学药剂实验室提供)；扶他林缓释片(北京诺华制药有限公司产品，批号05007)在研钵中研成粉末，蒸馏水配制成6.3mg／ml的混悬液，用时摇匀给药。? 1.3 主要仪器与试剂：ELX800酶标仪，奥地利Dialab公司。PLA2检测试剂盒，美国RD公司。Bradford蛋白浓度测定试剂盒，碧云天生物技术研究所。? 1.4 动物模型制作、分组与给药：将36只大白兔采用Key和Ford法［6］建立腰4／5椎间盘突出症动物模型。造模成功后随机分为3个组(采用活血化瘀法治疗的治疗组、采用扶他林治疗的对照组、采用生理盐水的空白对照组)，每组12只。造模成功后灌胃给药，1天1次，活血化瘀治疗组(6.3g／kg)，扶他林对照组(6.3mg／kg)，空白对照组(等容量生理盐水)。? 1.5 取材：每组分别于治疗后2、4、6周随机取3只兔子取材，耳缘静脉空气栓塞处死，迅速切取L4／5髓核，放入干燥的消毒管内，液氮速冻后，置于?-80℃?冰箱保存待测。? 1.6 实验方法：具体方法如下。? 1.6.1 髓核匀浆的制备：从低温冰箱中取出髓核，室温下每个髓核称取20mg，放入低温匀浆机，加匀浆液2ml，保持4℃高速匀浆机匀浆30秒，3500r／min离心20分钟，离心后取上清液-20℃保存待测。? 1.6.2 髓核的蛋白测定：按Bradford蛋白浓度测定试剂盒说明书进行(Bradford法)。? 1.6.3 髓核PLA2活性的测定：按PLA2检测试剂盒说明书进行(微孔比色法)，并计算结果。? 1.7 统计方法：全部数据采用均数±标准差(x±s)表示，组间t检验。? 2 实验结果? 2.1 治疗2周时对PLA2活性的影响：具体见表1。从表中可以看出，2周时空白对照组PLA2活性高于治疗组PLA2活性，但无统计学差异；空白对照组PLA2活性和对照组比较有统计学差异；治疗组和对照组无统计学差异(P＞0.05)，说明2周时活血化瘀法可能有抑制PLA2活性的作用，但不显著；扶他林有明显抑制PLA2活性的作用。?? 2.2 治疗4周时对PLA2活性的影响：具体见表2。从表中可以看出，4周时，空白对照组PLA2活性远高于治疗组和对照组，有统计学意义(P＜0.05)，治疗组和对照组无统计学差异(P＞0.05)，说明活血化瘀法和扶他林均有明显抑制PLA2活性的作用。?? 2.3 治疗6周时对PLA2活性的影响和三组的蛋白含量两两之间比较：6周时空白对照组PLA2活性值远高于 治疗组，与治疗组和对照组比较，均有显著性差异(P＜0.01)，治疗组和对照组比较无统计学意义(P＞0.05)。说明活血化瘀法和扶他林均有明显抑制PLA2活性的作用。三组蛋白含量两两之间比较，无统计学意义(P＞0.05)。见表1、表2、表3。?? 3 讨论? 过去，一直认为机械压迫是导致腰椎间盘突出症引起的神经根疼痛的唯一原因。但自Saal［3］首次测定腰椎间盘突出症中手术切除的椎间盘组