题三 课题2 月季的花药培养.ppt

知识回顾 单倍体育种的过程？ 取决：培养基中的激素种类及浓度配比 胚状体 ——在组织培养过程中，某些细胞在形态上转变为与合子发育成的胚非常相似的结构，发育过程亦与合子胚类似； ⑦为什么花瓣松动会给材料的消毒带来困难？ 花瓣松动后，微生物就可能侵入到花药，给材料的消毒带来困难。 （二）材料的消毒 5、无菌水冲洗3～5次 花药的外面有花萼、花瓣保护，通常处于无菌状态 * 课题2 月季的花药培养 花药离体培养（N） 单倍体植株（N） 秋水仙素处理，使染色体翻倍 植株（2N） 特点：1 明显缩短育种年限 2 后代植株都为纯合子。 正常植株（2N） 花丝 花药：囊状结构，内有很多花粉 雄蕊 一、被子植物的花粉发育 花粉母细胞 （小孢子母细胞） 4个小孢子 减数分裂 小孢子四分体 1个小 孢子 （单细胞花粉粒） 花粉粒 （双核） 有丝分裂 单核 双核 花粉母细胞 （小孢子母细胞） 4个小孢子 减数分裂 小孢子四分体 1个小 孢子 花粉粒 （双核） 有丝分裂 单核 双核 花粉管细胞核 营养细胞 生殖细胞核 2个精子 花粉是单倍体的生殖细胞 小孢子母细胞 小孢子 花粉囊 花药 花粉粒（双核期） 成熟花粉 8个精子 小孢子母细胞 （ ）时期 单核（ ）期 双核期 （ ）细胞核 （ ）细胞核 （ ）细胞 （ ）细胞 （ ）个精子 （ ）分裂 （ ）分裂 单核（ ）期 （ ）分裂 减数 小孢子四分体 中 边 有丝 生殖 生殖 花粉管 营养 有丝 2 2N N N N N N N N N 1、关于被子植物花粉发育的说法，不正确的是（ ） A、花粉粒是在花药中的花粉囊里形成的 B、被子植物精子的形成是直接减数分裂的结果 C、被子植物的花粉的发育要经历四分体时期、单核期、双核期等阶段 D、花粉粒在发育过程中，核先位于细胞一侧，再移到细胞中央 BD 二、产生花粉植株的两条途径 神奇的人工种子 :通过胚状体途径形成小植株 烟草花药培养 胚状体发育途径 愈伤组织转接种到再生培养基 愈伤组织分化形成再生植株 水稻花药培养 愈伤组织发育途径 部分花药产生愈伤组织 接种在平板上的水稻花药 不同植物的诱导成功率很不相同，就同一种植物来说亲本的生理状况对诱导成功率也有直接影响。 ②选择合适的花粉发育时期是提高诱导成功率的重要因素。 因为并不是任何时期的花粉都可以经过培养产生愈伤组织或胚状体，花粉发育的过程中，只有某一个时期对离体刺激敏感。 选材是否成功是花药培养成功的关键。 ①选材 三、影响花药培养的因素 一般来说，在单核期，细胞核由中央移向细胞一侧的时期，花药培养的成功率最高。即：最适合花药培养的小孢子发育时期为单核靠边期。 选择单核期以前的花药接种，质地幼嫩，极易破碎； 选择单核期之后的花药接种，花瓣已有些松动，又给材料的消毒带来困难，且难以挑选到单核期的花药。 ③花药培养时期的选择 ④其它时期选择的缺点 为了挑选到单核期的花药，通常选择完全未开放的花蕾。盛开的或略微开放的花，都不宜选作实验材料。 ⑥选择完全未开放花蕾的原因 完全未开放的花蕾，可挑选到单核期的花药，菌少、易消毒 ⑤单核期花药的挑选 ⑦花药培养时间 一般月季的花药培养时间选在5月初到5月的中旬，即月季的初花期。初花期的花蕾营养状态及生理状态会比较好，可提高花粉的诱导成功率。 （一）材料选取 2、通过镜检来确定是否处于适宜的发育期。 方法：醋酸洋红法(将染色体染成红色) 焙花青-铬矾法(花粉细胞核染成蓝黑色)。 1、从花药看：月季的初花期 从花粉看：单核期 从花蕾看：完全未开放的 花药（载玻片上）→1%的醋酸洋红1滴→用镊柄将花药捣碎，盖上盖玻片→镜检（花粉粒的细胞核被染成红色） 花药（在卡诺氏固定液中处理20min）→取出，置于载玻片上→焙花青－铬矾溶液染色→盖上盖玻片→镜检（花粉粒的细胞核被染成蓝黑色） 四、实验操作 1、花蕾用体积分数为70%的酒精浸泡30秒 2、无菌水清洗 3、无菌吸水纸吸干花蕾表面的水分 4、放入质量分数为0.1%的氯化汞溶液中2～4分钟 （质量分数为1%的次氯酸钙溶液或饱和漂白粉溶液） *