VEGF165反义RNA表达对人胃癌细胞恶性生物学行为的影响.docVIP

　　VEGF165 反义RNA表达对人胃癌细胞恶性生物学行为的影响 　　摘 要:目的 利用本室构建的反义VEGF165 （血管内皮生长因子，vascular endothelial grom3 明显小于未转染细胞所致的移植瘤体积（1534±363）mm结论VEGF反义RNA可以通过抑制肿瘤组织血管生成而防治肿瘤的生长，另外VEGF的表达可能与细胞增殖能力有关. 　　Keyach neoplasms;vascular endothelial groan gastric cancer cells by antisense nucleotide technique.METHODS The VEGF165 antisense gene rebinant ice of transfected cells ined.RESULTS Introduction of the VEGF165 antisense construct into SGC-7901cells resulted in a marked reduction in the expression of VEGF-specific mRNA and protein by dot blot and immunofluorescence staining analysis in transfected tumor cells.Cell cycle analysis shober of trans-fected cells had an increase（0.39）in G2 /M phase，a decrease（0.54）in S phase，and its colony forming rate（2.2%）e of tumor（345±136）mm3 in the nude mice inoculated m3 in the nude mice inoculated ight inhibit the groor;in addi-tion，it might correlate or cells. 　　0 引言 　　血管形成与肿瘤的发生、生长、转移及预后有密切的关系.目前治疗肿瘤的各种药物主要是针对肿瘤细胞本身进行的，但恶性肿瘤生长和转移的血管依赖性提示，通过抑制肿瘤新生血管形成可以防治肿瘤的生长与转移，开辟治疗肿瘤的第二战场［1，2］ .我们拟采用VEGF/VEGFR为靶点进行反义核酸抗肿瘤治疗，主要基于以下考虑:①VEGF是一个强有力的血管内皮细胞促分裂因子，并能增加毛细血管的通透性.许多实体肿瘤组织细胞均高水平表达VEGF［3-5］ ，且表达量与肿瘤的恶性程度正相关.正常组织中仅肾、卵巢等少数脏器有较高水平的表达 ［6，7］ .胃肠道肿瘤以外的正常上皮、增生性息肉、腺瘤则未见VEGF及其受体的表达［8］ ;②虽然发现至少有十四种生长因子具有刺激新生血管形成的作用，但只有VEGF专一作用于血管内皮细胞，而且现已发现有许多生长因子，如TGF-β刺激新生血管形成的作用是全部或部分通过诱导VEGF表达而实现的;③已有研究用VEGF单克隆或多克隆抗体有效抑制新生血管形成和肿瘤生长的报道. 　　1 材料和方法 　　1.1 材料 　　限制性核酸内切酶、无DNA酶的Rnase购自Promega公司，Lipofect Amine由Gibco公司提供.G418由Sigma公司提供.RNA地高辛标记试剂盒（SP6/T7）购自Boehringer Mannheim公司.FITC标记的羊抗兔IgG由Vector公司提供.人胃癌细胞系SGC-7901、宿主菌E.coli DH5α等均为本校全军消化性疾病研究所保存.含有605bp的VEGF165 cDNA基因被克隆在pGEM-3Zf（+）的BamHI位点质粒pGEM-hVEGF由美国加利福尼亚大学医学院癌症研究所Abraham教授惠赠;pcDNA3 真核表达载体由本校生物化学教研室柴玉波博士惠赠.根据质粒图谱，将EcoRI+HindIII消化pGEM-hVEGF后得到的VEGF165 cDNA反向克隆至由此两种酶消化后的pcDNA3 中，成功构建了反义RNA表达质粒-pcDNA-as-hVEGF.BALB/c裸小鼠由本校实验动物中心提供并饲养. 　　1.2 方法 　　1.2.1 VEGF反义基因转染及转染细胞的鉴定 　　SGC-7901细胞在含100mL#12539;L-1 小牛血清的完全RPMI1640培养基中贴壁生长，37℃，50mL#12539;L-1 CO2 条件下培养，以2.5g#12539;L-1 胰酶消化传代.在6孔板中接种指数期生长的细胞，过夜培养，直至细胞50%汇片.用无血清RPMI1640