VEGF单克隆抗体对胰腺缺血再灌注损伤中细胞凋亡的影响.docVIP

　　VEGF单克隆抗体对胰腺缺血再灌注损伤中细胞凋亡的影响 ：杨家红 谢嵘 王莹 范昕 【摘要】 目的： 从胰腺腺泡细胞凋亡的角度探讨血管内皮生长因子（VEGF）单克隆抗体在胰腺缺血再灌注损伤中保护作用。方法： 采用钳闭大鼠腹腔干、肠系膜上动脉制备胰腺缺血再灌注损伤模型，并应用细胞凋亡原位标记法(TUNEL)、免疫组化技术等检测VEGF单克隆抗体干预后对胰腺细胞凋亡及Bax,Bcl2蛋白表达的影响。结果： 干预组15，30，60 min胰腺细胞凋亡指数显著低于缺血再灌注组(Plt;0.01)。正常胰腺组织未见凋亡调控基因Bcl2的表达, VEGF单克隆抗体干预后15，30，60 min胰腺细胞Bcl2染色阳性率明显高于缺血再灌注组(Plt;0.01)；正常胰腺组织见较弱的凋亡调控基因Bax的表达，而VEGF单克隆抗体干预后15，30，60 min胰腺细胞Bax染色阳性率明显低于缺血再灌注组(Plt;0.01)。结论： VEGF单克隆抗体能够通过抑制胰腺腺泡细胞的过度凋亡减轻胰腺炎的严重程度，该作用可能是通过促进抗凋亡Bcl2基因表达，抑制促进凋亡基因Bax表达来实现的。 【关键词】 胰腺； 缺血再灌注； 细胞凋亡； VEGF单克隆抗体； Bax； Bcl2 ［Abstract］ Objective: To investigate the effect of VEGF McAb protecting on pancreas injury during experimental ischemic/reperfusion in rats.Methods： Ischemic/reperfusion models ade by ligated both the anterior menseneric artery and the celica artery of 70 rats.Apoptosis of pancreatic acinar cells inal deoxynucleotidyl transferase mediated dUTPbiot in nick end labeling(TUNEL) method, and the expression of apoptosis regulated gene Bax and Bcl2 munohistochemical technique. Results： The index of apoptosis increased significantly in pancreatic tissues after pancreatic ischemia/reperfusion injury but offset by administration of VEGF McAb.Immunohistochemical analysis shoal pancreatic tissues.The positive rate of Bcl2 protein in VEGF McAb group ic/reperfusion group ent alleviated pancreatic ischemia/reperfusion injury by restraining excessive apoptosis.This effect might be related ic/reperfusion; apoptosis; VEGF McAb; Bax; Bcl2 缺血再灌注(ischemia/reperfusion，I/R)损伤是一种常见的临床病理生理过程，在急性胰腺炎(AP)的发病机理中起着重要作用。近年的研究发现，I/R损伤与细胞凋亡有着密切的联系［1］，现已证实，AP大鼠的发病过程中胰腺存在细胞凋亡的改变，且与其病变的严重程度有关［2］。本实验旨在探讨血管内皮生长因子(VEGF)单克隆抗体在I/R损伤后对胰腺细胞凋亡的影响及其可能的机制，以探讨AP 治疗 的新途径。 1 材料与方法 1.1 动物及主要试剂 清洁级SD大鼠共70只，雌雄不限（江苏大学医学院实验动物中心提供），VEGF单克隆抗体（Santa Cruz 公司），鼠抗Bcl2单克隆抗体（北京中山生物技术有限公司）、兔抗Bax单克隆抗体（Santa Cruz公司），链霉素亲生物素过氧化物酶标(SP)免疫组化试剂盒(Biotech公司产品)。 1.2 方 法 1.2.1 动物分组 成年anheim公司试剂盒说明操作，光镜下观察 计算 凋亡指数。凋亡指数(apoptosis index，AI)计算方法:数4个高倍视野，分别计算凋亡细胞数和总细胞数，AI=凋亡细胞数/总细胞数×100% 1.3