刺参黏多糖对Hela细胞增殖分化的影响.docVIP

　　刺参黏多糖对Hela细胞增殖分化的影响 【关键词】 刺参 葡糖氨基聚糖类 Hela细胞 细胞增殖 细胞分化 　　［ABSTRACT］ Objective To investigate the effect of Stichopus japonicus acidic mucopolysaccharide (SJAMP) on proliferation and differentiation of Hela cells and its corresponding mechanism. Methods Hela cells icroscope. CyclinD1, CDK4, Cmyc mRNA expressions ined by reverse transcription polymerase chain reaction (RTPCR). Results An inhibitory effect of SJAMP edependent manner. Electron microscopy observation shooted cells differentiation. SJAMP decreased the mRNA expressions of CyclinD1, CDK4 and Cmyc genes. Conclusion SJAMP might inhibit the proliferation of Hela cells via decreasing the expressions of CyclinD1, CDK4, and induct the differentiation of Hela cells via decreasing the expressions of Cmyc gene. 　　［KEY P)是由刺参体壁提取的一种动物酸性黏多糖[1]。经药理实验结果证明，SJAMP具有广谱抗肿瘤、抗凝血及增强机体免疫功能等活性[2,3]，特别是其抗肿瘤作用日益受到重视。王振立等[4]研究结果显示，SJAMP可明显抑制肿瘤细胞DNA的合成从而抑制肿瘤生长，而对正常细胞的DNA合成有明显促进作用，这有利于正常细胞的增殖，表明SJAMP对肿瘤细胞及正常细胞具有一定的选择性作用。本实验选择人宫颈癌细胞Hela系作为研究对象，探讨了SJAMP对Hela细胞增殖、分化的作用及其可能的作用机制。 　　1 材料和方法 　　1.1 材料 　　人宫颈癌细胞Hela系，青岛大学医学院微生物学实验室赠；SJAMP，中国海洋大学医药学院提取，相对分子质量122 248，纯度99.5%；DMEM培养基、胰蛋白酶，GIBCO公司产品；胎牛血清，杭州四季青公司产品；TRIzol试剂，GIBCO公司产品；反转录试剂盒，Promega公司产品；Taq DNA聚合酶，上海中科开瑞生物芯片科技股份有限公司产品；DNA Marker、Marker 2000，Takara公司产品。BNP310恒温CO2培养箱，日本TABAI ESOEC公司；PCR仪，Biometra公司；EAR 400AT酶标仪，奥地利；JEM扫描电镜，日本JEOL公司；ViDAS21图像分析系统，德国欧波同公司；天能凝胶图像分析系统，上海天能科技公司。 　　1.2 方法 　　1.2.1 细胞培养 Hela细胞常规培养于含有体积分数0.10胎牛血清，100 kU/L青霉素和100 mg/L 链霉素的DMEM培养基中，置于37℃，体积分数0.05的CO2培养箱中培养。 　　1.2.2 SJAMP对Hela细胞增殖的作用观察 采用MTT法。取指数生长期细胞加消化液消化制成单细胞悬液，计数、调整细胞浓度为1×107/L，取上述细胞悬液接种于96孔板，每孔200 μL。每组做6个平行样品。37 ℃，体积分数0.05的CO2孵育过夜，使细胞贴壁生长。第2天换含不同浓度SJAMP（0.5、1.0、2.0、4.0、8.0 g/L）的培养液，对照组换不含SJAMP的培养液，均置37 ℃，体积分数为0.05的CO2孵育。药物作用3 d后，加入5 g/L的MTT20 mL，37 ℃孵育4 h，去掉上清液，采用细胞内形成的蓝色结晶溶解于150 μL DMSO。酶联免疫检测仪测定570 nm波长处各孔吸光度（A）值,按公式计算SJAMP对Hela细胞的抑制率。抑制率=(对照组A值-实验组A值)／对照组A值×100%。 　　1.2.3 不同浓度SJAMP作用后Hela细胞的形态结构变化观察 用浓度为0.8、1.2和1.6 g/L 的SJAMP培养液分别在细胞培养瓶中作用于Hela细胞1、3、5 d，对照组Hela细胞正常生长1、3、5 d，在相应时间点倒掉培养