去甲肾上腺素对胰腺癌细胞株MiaPaCa2侵袭能力的影响.docVIP

　　去甲肾上腺素对胰腺癌细胞株MiaPaCa2侵袭能力的影响 ：郭坤，沙焕臣，马清涌，王连才，胡恒通 【摘要】 目的 探讨经典神经递质去甲肾上腺素(norepinephrine, NE)对人胰腺癌细胞株MiaPaCa2侵袭能力的影响及其作用机制。方法 取人胰腺癌细胞株MiaPaCa2为研究对象，实验分为空白对照组、0.1μmol/L NE干预组、1μmol/L NE干预组和10μmol/L NE干预组。干预48h后，采用TransRNA的表达;免疫细胞化学法检测细胞中MMP2、MMP9和VEGF蛋白的表达。结果 1μmol/L NE干预组和10μmol/L NE干预组MiaPaCa2细胞的侵袭能力均高于空白对照组(Plt;0.01);1μmol/L NE干预组和10μmol/L NE干预组MiaPaCa2细胞中MMP2、MMP9和VEGF mRNA和蛋白表达水平均高于空白对照组(Plt;0.05)。结论 NE可以通过上调MMP2、MMP9和VEGF的表达从而促进胰腺癌细胞发生远处侵袭转移。 【关键词】 胰腺癌;细胞侵袭;神经递质;去甲肾上腺素 　　ABSTRACT: Objective To investigate the effect of norepinephrine (NE) on the invasiveness of pancreatic cancer cell line MiaPaCa2 and its action mechanism. Methods The pancreatic cancer cell line MiaPaCa2 ly divided into control group, 0.1μmol/L NE intervention group, 1μmol/L NE intervention group and 10μmol/L NE intervention group. After intervention for 48h, Transine the changes of invasive ability of MiaPaCa2. The expressions of MMP2 mRNA, MMP9 mRNA and VEGF mRNA easured by semiquantitative RTPCR; the levels of MMP2, MMP9 and VEGF proteins easured by immunocytochemical method. Results The invasive ability of MiaPaCa2 in 1μmol/L NE intervention group and 10μmol/L NE intervention group RNA and protein expression of MiaPaCa2 in 1μmol/L NE intervention group and 10μmol/L NE intervention group ote the invasiveness of MiaPaCa2 through upregulating the expressions of MMP2, MMP9 and VEGF. 　　KEY iaPaCa2在不同浓度经典神经递质去甲肾上腺素(norepinephrine, NE)的干预下侵袭能力的变化，以及细胞中MMP2、MMP9、VEGF mRNA和蛋白表达的变化，探讨NE对胰腺癌细胞侵袭能力的影响及其作用机制。 　 　1 材料与方法 　　1.1 材料 胰腺癌细胞株MiaPaCa2由西安 交通 大学医学院中心实验室提供;高糖DMEM培养基及小牛血清购自Gibco公司;去甲肾上腺素购自Sigma公司;兔抗人MMP2、MMP9、VEGF多克隆抗体购自北京博奥森公司;免疫组化SP试剂盒及DAB试剂盒购自北京中杉金桥生物技术公司;总RNA提取试剂盒(RNAfast200)购自上海飞捷生物技术公司;逆转录试剂盒购自MBI公司;PCR试剂盒购自TaKaRa公司;引物由上海生物工程技术服务有限公司合成;Millicell小室购自美国Millipore公司;Matrigel基质胶及MTS试剂盒购自BD公司;PCR扩增仪为Gene公司产品。 　　1.2 细胞培养与实验分组 MiaPaCa2细胞用含100mL/L小牛血清的高糖DMEM培养基在37℃，50mL/L CO2的培养箱中培养。取对数生长期细胞，经胰酶消化后制成细胞密度为5×105/mL的细胞悬液，将其接种于细胞培养板，待细胞贴壁后，弃去培养基，分别加入NE浓度为0、0.1、1、10μm