大剂量维生素C对外周血细胞活性的影响.docVIP

　　大剂量维生素C对外周血细胞活性的影响 ：薛美兰 张秀珍 马爱国 姜秀波 张金玉 【摘要】 目的 观察大剂量维生素C（VC）对外周血淋巴细胞增殖活性、抗DNA氧化损伤能力以及红细胞膜流动性的影响。方法 将48只DA）含量，红细胞膜谷胱甘肽过氧化物酶（GSHPx）活性、红细胞膜流动性、淋巴细胞增殖活性，单细胞凝胶电泳计数彗星细胞测量DNA氧化损伤水平。结果 与对照组比较，A组血浆SOD活性明显增高（F=2.987,q=4.24，Plt;0.05），血浆MDA含量明显降低(F=4.176,q=4.23，Plt;0.05)，红细胞膜流动性和外周血淋巴细胞增殖活性均明显增高（F=2.278～2.763,q=3.67-3.84，Plt;0.05）；C组的血浆VC含量明显升高（F=3.235,q=4.63，Plt;0.01），SOD和红细胞膜GSHPx活性明显降低（F=2.987、3.478,q=3.68～4.13，P均lt;0.05），MDA含量明显增高（q=4.08，Plt;0.05）。10 μmol/L H2O2诱发DNA损伤B组和C组较对照组均加重（F=4.137,q=3.94、4.25，Plt;0.05）。结论 较高剂量VC（2 000 mg/kg）可明显增高大鼠机体的抗氧化损伤水平，改善红细胞膜流动性，提高淋巴细胞的增殖活性；当VC剂量超过5 000 mg/kg时，反而会加重淋巴细胞的DNA氧化损伤。 【关键词】 抗坏血酸；超氧化物歧化酶；膜流动性；淋巴细胞活化；DNA损伤 　　维生素C（VC）是一种水溶性维生素，具有抗氧化活性。一般认为VC是水溶性的，不能在体内蓄积，摄入较高剂量不会对机体产生危害。已知超大剂量服用VC会产生副作用，包括胃胀气、腹泻、呕吐等。有一项体外研究指出，VC抗氧化作用与其剂量有密切关系[1]，过大剂量的VC（0.5 mmol/L）可能增加细胞DNA对H2O2或其他有害物质损害的敏感性。目前，健康机体摄入高剂量的VC是否有不良影响尚无定论。本实验通过体内实验对大鼠进行超出生理需要量数倍的大剂量VC干预，观察大剂量VC对健康幼年大鼠外周血淋巴细胞增殖活性和抗DNA氧化损伤能力以及红细胞膜流动性的影响及其可能机制。现将结果报告如下。 　　1 材料与方法 　　1.1 动物分组及处理 　　幼年DA）含量以及红细胞膜谷胱甘肽过氧化物酶（GSHPx）活性测定SOD活性测定采用羟胺法，GSHPx活性测定采用DTNB直接法，MDA含量测定采用硫代巴比妥酸比色法。SOD、GSHPx、MDA试剂盒均由南京建成生物工程研究所提供。 　　1.2.4 红细胞膜流动性测定 采用Log/L, DPH荧光标记红细胞膜。应用美国PE公司LS50型荧光分光光度计测荧光偏振度，Ex 362 nm，Em 432 nm，狭缝10 nm，温度25 ℃，按文献[4]公式计算荧光偏振度P值和微黏滞度η值。 　　1.2.5 外周血淋巴细胞增殖活性的测定 采用ELX 2800酶标仪(美国BioTek公司)，四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法测定。 　　1.2.6 DNA氧化损伤分析 采用单细胞凝胶电泳或彗星电泳技术检测[3]，取新鲜抗凝血30 μL，经分离获取淋巴细胞，分别应用0、10、25 μmol/L的H2O2氧化处理5 min。将DAPI荧光染色的细胞核在荧光显微镜下观察100个“彗星”细胞，根据拖尾的长度衡量DNA链断裂损伤程度（AU）[4]。 　　1.3 统计学处理 　　采用SPSS 11.0和PPMS 1.5[5]统计软件进行数据处理，数据间比较采用单因素方差分析。 　　2 结果 　　2.1 各组血浆VC、SOD、MDA含量和红细胞膜GSHPx活性比较 　　与对照组比较，A组血浆SOD活性升高（F=2.987,q=4.24，Plt;0.05），MDA含量显著下降（F=4.176,q=4.23，Plt;0.05）；C组的血浆VC含量明显升高（F=3.235,q=4.63，Plt;0.01），SOD活性明显下降（q=4.13，Plt;0.05），MDA含量明显升高（q=4.08，Plt;0.05），红细胞膜GSHPx 活性明显下降（F=3.475,q=3.68，Plt;0.05）。与A组比较，B组和C组MDA含量明显升高（q=4.73～5.20，Plt;0.01），SOD活性明显下降（q=3.58～3.65，Plt;0.05）；C组的血浆VC含量明显升高（q=4.51，Plt;0.01），红细胞膜GSHPx 活性明显下降（q=3.84，Plt;0.05）。 见表1。 　　表1 各组血浆VC、SOD、MDA含量和红细胞膜GSHPx活性比较（略） 　　与对照组比较，F=2.987～4.1